生物学实验教案模板(精选8篇)由刀豆文库小编整理,希望给你工作、学习、生活带来方便,猜你可能喜欢“普通生物学实验教案”。
第1篇:发育生物学实验教案
发育生物学实验教案
实验一
模式生物蛙、海胆胚胎发育各阶段切片观察
一、实验目的了解模式生物发育过程中的形态变化。
二、实验原理
在多种动物中,胚胎发育经历受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期,不同时期具有不同的特点,在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化。
三、试剂与材料 1.实验试剂
香柏油、显微镜 2.实验材料
模式生物切片、装片(蛙、海胆)
四、实验步骤
观察模式生物发育各时期的胚胎形状变化。
五、实验作业
记录形态学变化。
实验二
模式生物鲫鱼、鸡胚胎发育各阶段切片观察
一、实验目的了解模式生物发育过程中的形态变化。
二、实验原理
在多种动物中,胚胎发育经历受精、桑椹胚、囊胚、原肠时期、神经时期,不同时期具有不同的特点,在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化。
三、试剂与材料 1.实验试剂
香柏油、显微镜 2.实验材料
模式生物切片、装片(鲫鱼、鸡)
四、实验步骤
观察模式生物发育各时期的胚胎形状变化。
五、实验作业
记录形态学变化。
实验三
两栖类变态过程的观察
一、实验目的了解两栖类动物变态过程中的形态变化。
二、实验原理
在多种动物中,胚胎发育经历一个幼虫期,幼虫具有与成体非常不同的特点,在发育中其形态和构造经历明显的阶段性变化,其中有一些器官退化消失,有些得到改造,有些新生出来,从而结束幼虫期,建成成体结构,这种现象统称为变态。
三、试剂与材料 1.实验试剂
何尔夫列他溶液(氧化钠0.35g,氯化钾0.005g,二氯化钙0.01g,碳酸氢钠0.02g,蒸馏水100mL)2.实验材料
蛙的蝌蚪
四、实验步骤
人工饲养青蛙,观察其变态过程中的形态变化。
五、实验作业
记录蛙变态过程中的形态学变化。
[附] 蛙的饲养方法
卵和蝌蚪的培养最好用洁净的自来水,并加上稀释5-6倍的何尔夫列他液(氧化钠0.35g,氯化钾0.005g,二氯化钙0.01g,碳酸氢钠0.02g,蒸馏水100mL),这样可以增加胚胎和蝌蚪发育所必需的钠、钙、钾离子。培养水要多而清洁,否则会因缺氧而致死。
蝌蚪主要吃植物性饲料,如水藻等。煮过的菠菜和莴苣是最适宜的食物,但投喂时不宜煮得太熟,并注意除去纤维。初次投食量要小,以后可不断增加。每天定时定量投喂,不宜过多,以防残渣腐败,造成水体污染。若用缸、盆培养,或水体较小,一般3-5d换一次水较好。当蝌蚪发育成带有短尾的幼体开始用肺呼吸时,若用池塘培养,水中必须放些水草,或小木条,以供其登陆用。若为缸、盆培养,水里可放一些泡沫塑料。
成体主要吃昆虫之类的动物性食物,以直翅目、鞘翅目、膜翅目、蜻蜓目为最多,其次为双翅目、脉翅目、半翅目等昆虫。有时也食蛛形动物、蚯蚓,甚至也以谷粒、鱼苗或蝌蚪及小蛙为食。
实验四
鸟类胚胎发育的观察
一、实验目的熟悉鸟类胚胎发育的过程。
二、实验原理
鸟类胚胎发育是典型的体外发育,利用人工孵化的家禽,可以方便观察其发育过程。鸡胚胎发育可分为两个阶段:成蛋阶段和成雏阶段。(1)胚胎在卵形成过程中的发育
即母体内的发育,也即是成蛋阶段的发育。这个阶段的发育过程是,受精卵+卵裂+囊胚期+原肠期。当胚胎发育到原肠期时,已分化形成上胚层和下胚层,从外观上看形如一个圆盘状体即为胚盘,当卵排出体外,因温度下降,胚胎生长发育随即停止。(2)胚胎在孵化过程中的发育
卵排出体外后,保存在18℃以下的环境中,胚胎发育基本处于静止状态。当人孵后,胚胎即开始发育。胚胎在孵化过程中发育的时期称孵化期。鸡的孵化期为21天。
种蛋人孵后,胚胎在原肠期形成的同时,上胚层像个碟状圆盘,在其末端,细胞不断地向中线集中,形成一条细胞带,称原条。原条细胞通过原沟的底部逐渐转人上胚层与下胚层之间,并分别向两侧扩展,这些迁移至上下胚层之间的细胞称为中胚层。原条细胞也逐渐转人上胚层与内胚层之间,并分别向前伸展,伸展的结构称为头突,后发育成脊索。脊索是胚胎期的纵轴支持器官,最终为脊柱所代替,随着胚胎的不断发育,由外、中、内三个胚层逐渐形成各种腺体、器官、骨骼、肌肉、皮肤、羽毛和喙,最后形成新的机体—雏鸡。
三、试剂与材料
鸡的种蛋
四、实验步骤
1.观察比较种蛋(受精)与非种蛋(未受精)内部结构的差异。2.观看教学片,熟悉鸡的胚胎发育过程。2.人工孵化种蛋,记录鸡的孵化进程及特征。
五、实验作业
拍照记录鸡孵化进程中的特征变化。
[附]
1.鸡胚发育进程及特征
1胚龄:蛋黄表面有一颗颜色稍深,四周稍亮的圆点,俗称“鱼眼珠”或白光珠。2胚龄:可看到卵黄囊血管区,其形状很象樱桃形,故俗称为为“樱桃珠”。3胚龄:卵黄囊血管的形状象静止的蚊子,俗称“蚊虫珠”。卵黄颜色稍深的下部似月牙状,俗称“月牙”。
4胚龄:蛋转动时,卵黄不易跟随着转动,俗称为“钉壳”。5胚龄:明显看到黑色的眼点,谷称“起珠”、“单珠”、“起眼”(若为5天整,还可见到些羊水)。
6胚龄:胚胎形似“电话筒”,一端是头部,另一端为弯增大的躯干部,俗称“双珠”。可以看到羊毛。
7胚龄:白茫茫的羊水增多,胚胎活动尚不强,胚胎在羊水中不易看清,似沉在羊水中,俗称“沉”。正面已布满扩大的卵黄和血管。
8胚龄:胚胎较易看到,象在羊水中浮游一样,俗称“浮”。从背面看,卵黄已扩大到背面,蛋转动时二边卵黄不易晃动,俗称为“边口发硬”。9胚龄:蛋转动时,二边卵黄容易晃动,背面尿囊血管迅速伸展越出卵黄,故俗称为“发边”。10胚龄:尿囊血管继续伸展,在蛋的小头合拢,整个蛋除气室外都布满了血管,俗称为“合拢”、“长足”。
11胚龄:血管开始加粗,血管颜色开始加深,解剖背部出现绒毛,腺胃明显可辨。12胚龄:血管加粗、颜色逐渐加深。解剖身躯覆盖绒毛。
13胚龄:主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增长而逐日缩小。头部和身体大部分覆盖绒毛,跖、趾出现角质鳞片原基。
14胚龄:小头发亮的部分随着胚龄增长而逐日缩小,蛋内黑影部分随着胚龄增长而加大,胚胎全身覆盖绒毛,头向气室,胚胎开始改变横着的位置,逐渐与蛋长轴平行。
15胚龄:蛋内黑影部分增大。解剖观察,翅已完全成形,跖、趾的鳞片开始形成,眼脸闭合。体内外的器官大体上部形成了。
16胚龄:黑影继续燕大,解剖冠和肉髯明显,绝大部分蛋自己进入羊膜腔。17胚龄:以小头对准光源,再看不到发亮的部分,俗称“封门”。躯干增大,脚、翅、颈变大、眼、头日益显小,两腿紧抢头部。喙向气室。
18胚龄:气室向一方倾斜,这是胚胎转身的缘故,俗称为“斜口”、“转身”。解剖头弯曲在右翼下,眼开始睁开。
19胚龄:喙进气室,开始呼吸,颈、翅突入气室,头埋右翼下,两腿弯曲朝头部,呈抢头姿势,以便于破壳时挣扎。雏胚开始啄壳,可闻雏鸣叫。照蛋时,可见气室有翅膀、喙、颈部的黑影闪动,俗称“闪毛”。
20胚龄:起初是胚胎喙部穿破壳膜,伸入气室内,称为“起嘴”;接着开始啄壳,称“见嘌”、“啄壳”。
20.5-21胚龄:出壳。2.鸡的人工孵化
鸡属鸟类,鸟类与哺乳动物胚胎发育不同,受精卵(种蛋)排出母体后完全依赖外界环境条件继续发育。第1-4天为内部器官发育阶段;5-14天为外部器官形成阶段;15-19天为胚胎生长阶段;20-21天为出壳阶段。在整个孵化过程中,温度,湿度,通风换气与翻蛋等外界条件将是保证胚胎正常发育,并使孵化获得成功的关键因素。(1)温度:
温度是孵化过程的首要条件,发育中的鸡胚对温度最敏感,只有在适宜的温度下,才能保证鸡胚的正常生长发育和物质代谢。所以正确地掌握孵化温度是提高孵化率的关键。在1-18天中孵化的最适温度是37.5°C-38.6°C;19-21天则应稍低于此温度是36.1°C-37.5°C。如果温度过高胚胎发育迅速,孵化期缩短,胚胎死亡增加。温度过低则会延长种蛋的孵化时间,同时胚胎发育迟缓并带来死亡。(2)湿度:
水是温度的良导体,空气中的湿度对鸡胚胎发育有很大作用。一般要求1-18天相对湿度40%-60%;19-21天相对湿度65%-75%。若湿度过高会妨碍蛋内水分蒸发,使胚胎发育所产生的大量代谢水不能及时排出,严重时可导致胚胎畸形。若湿度过低,将加速蛋内水分蒸发,造成失水过多,阻碍代谢废物的排出及所需氧气的摄入。易引起胚胎和壳膜粘连。(3)通风换气:
通风换气的主要目的是帮助胚蛋中的胚胎与外界进行气体交换和热能交换,同时调节机内的温度。
胚胎发育过程中需要不断的吸入氧气,排出二氧化碳气和水分。孵化初期,胚胎需要少量氧气可通过酶的作用从蛋黄中获得,而后利用气室的空气,再后则利用尿囊循环与蛋壳上的气孔同外界进行气体交换,19天后胚胎开始用肺呼吸。随着胚龄的增加,胚胎的气体交换量也不断增加。因此除胚胎发育初期外,胚胎的气体交换都是由通风换气解决。
通风换气还与温度、湿度有密切的关系。通风良好时,空气能充分流通还能与外界不断的进行热能交换。温度、相对湿度都可保证。(4)翻蛋:
翻蛋的主要作用是改变胚胎方位,促进羊膜运动,防止胚胎、蛋黄、蛋白与蛋壳之间粘连。胚蛋放置位置必须适当,在1-18天进行定时翻蛋,每2小时翻蛋一次,翻蛋角度以90度为宜。
种蛋孵化到18天时,将种蛋移到出雏盘上叫落盘。这时胚胎发育完成,在20-21天时开始出壳。出壳时胚胎已经完全长成雏鸡。这时雏鸡的头位于气室中(即鸡蛋的大头部分),健壮的雏鸡先把蛋壳啄开一个小孔,然后慢慢的将小孔向两侧扩大,直至破壳到一半以上时,雏鸡的头便可脱壳而出,而后身体也逐渐自行挣脱出来。
1胚龄
2胚龄
3胚龄
4胚龄
5胚龄
6胚龄
7胚龄
8胚龄
9胚龄
10胚龄
11胚龄
12胚龄
13胚龄
14胚龄
15胚龄
16胚龄
17胚龄
18胚龄
19胚龄
20胚龄
20.5胚龄
替补实验
实验五
精子形态观察及体外获能实验
一、实验目的1.熟悉哺乳类精子的形态结构。2.了解精子体外获能的方法。
二、实验原理
哺乳动物的精子离开精巢后并没有受精能力,必须要经过成熟和获能才能使卵子受精。精子在附睾中成熟。成熟过程中,在附睾中多种物质的作用下,精子质膜的脂类、糖蛋白、唾液酸、吸收抗原、表面ATP酶等许多成分发生变化,负电荷增加,与凝集素的结合力也发生改变。精子射出后,经阴道和子宫到达输卵管,在壶腹部与卵子结合,完成受精。张明觉、Austin 1951年发现兔子和大白鼠直接排出的精子不能使卵受精,必须在生殖道中停留一段时间后才具备受精能力,这一现象称为精子的获能。后来研究发现,精子在体外也能完成获能,卵泡液、输卵管分泌物、血清、房水等多种液体都可使精子获能,pH、Ca2+浓度等环境条件对获能也有影响。精子在获能过程中发生一系列的形态及生理生化的变化,呼吸明显加强,运动形态和速度也发生很大变化,由直线前进变为曲线运动。
体外获能一般分为两步:一是精子的洗涤,经1次或多次离心后除去杂质、死精子、低活力精子、冻精保护液及稀释液等;二是精子的获能处理,主要是使用高离子强度液(His)、钙离子载体、肝素等,以促进钙离子进入精子顶体并刺激精子内部pH升高,从而诱发精子获能。
三、试剂与材料 1.实验试剂
IVF液(NaCl 5.803g/L,KCl 0.201g/L,NaHCO3 2.106g/L,CaCl2·2H2O 0.264g/L,丙酮酸钠0.055g/L,60%乳酸钠3.5mL,葡萄糖1.000g/L,青霉素G钾或钠盐0.063g/L,硫酸链霉素0.050g/L,酚红0.010g/L,Na2HPO4·12H2O 0.056g/L,MgCl2·6H2O 0.102g/L),牛血清白蛋白(BSA)2.实验材料
雄性小鼠
四、实验步骤
1.断颈处死雄性小鼠。
2.打开腹腔,剪取附睾尾(尽可能除去脂肪),将每个附睾尾放入已在37℃、5%CO2培养箱预平衡2h的2ml IVF液(加30mg/ml BSA)中。3.将附睾尾剪成几段,用镊子轻轻挤压之,使精子挤入培养液中,去掉附睾尾。4.吸打均匀后,1800 r/min离心5min,弃上清,以2ml IVF液重悬。5.将精子在37℃、5%CO2培养箱中培养1.5h,使之获能。6.镜检,观察获能精子的运动。
五、实验作业
观察比较精子在获能前后运动形态和速度的变化。
实验六
植物组织培养
一、实验目的了解植物细胞全能性。
二、实验原理
生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成完整个体所必需的全部基因。
三、试剂与材料 1.实验试剂
MS培养基、无菌水,升汞、酒精、次氯酸 2.实验材料
银杏枝叶
四、实验步骤
(一)培养基的配制 1.母液配制 母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四 类。2.培养基的配制与分装 3.培养基的灭菌
(二)取材、消毒与接种(1)先将剪下的枝条清洗干净,选择新鲜的花柄、嫩梢和带腋芽的茎段作为外植体,将外植体放在自来水下冲洗12h,以冲洗掉大的土壤颗粒。
(2)将清洗干净的外植体移入无菌操作台进行消毒,先用75%酒精表面消毒30S,再用0.1%新洁尔灭处理15min。消毒后用无菌水冲洗4~5次。
(3)将消毒后的外植体放入消毒过的培养皿上,在无菌条件下切成0.4~0.5 cm长的小段单芽,用无菌滤纸吸干水,立即接种到加有不同激素浓度的MS培养基上,每个培养基接种三个芽,并用封口膜封好。(三)外植体的培养
接种后的外植体放入用75%酒精消毒后的干净的光照培养箱中,培养条件为:温度27℃,光照周期为光照12h/d+黑暗12h/d,培养基的pH值为5.8,进行培养与愈伤组织的诱导。
全部接种工作都是在严格无菌条件下进行的 , 所以要特别认真、仔细、以防杂菌污染。
(四)两周后观察愈伤组织的诱导并进行生根生芽诱导
五、实验作业
1.观察植物组织培养的培养物在培养中的生长情况。
2.观察植物组织培养的培养物有无污染,分析原因?
3.以MS为例,试说明MS培养基中各成分各有何作用。
实验七
植物生长调节剂对果实发育的影响
一、实验目的1.了解2,4-D、萘乙酸对无籽果实形成的诱导作用。2.了解乙烯对果实的催熟作用。
二、实验原理
植物生长调节剂2,4-D、萘乙酸(NAA)等,在适当的浓度下能诱导无籽果实形成。适当浓度的乙烯利能促进果实成熟。
三、试剂与材料 1.实验试剂
20mg/L2,4-D(用少许1 mmol/L NaOH溶解2,4-D,再用蒸馏水定容),500mg/L NAA(用热水或少量95%乙醇溶解NAA,再用蒸馏水定容),40%乙烯利 2.实验材料
盆栽番茄、辣椒幼苗,香蕉(或大蕉、柿子、芒果等)
四、实验步骤
1.无籽果实的诱导形成(1)2,4-D诱导无籽果实
在番茄开花授粉前用2-3滴20mg/L 2,4-D溶液涂在花上,以水处理作对照。果实成熟时,观察果实内籽粒的有无。(2)NAA诱导无籽果实
在辣椒开花初期,用2-3滴500mg/L NAA溶液滴在花朵上(或喷花),以水处理作对照。果实成熟时,检查是否有籽。2.乙烯利对果实的催熟作用
将采收后的香蕉(或大蕉、柿子、芒果等)用500mg/L乙烯利溶液浸泡5s,以蒸馏水浸泡作对照,取出果实分别放在箩筐或纸箱内,室温保存。5-10d之内,观察结果。比较果皮的颜色和果实的成熟度
五、注意事项
1.用植物生长调节剂处理材料的时期一定要把握好。
2.可尝试使用不同的激素浓度,筛选出激素的最适作用浓度。
六、实验作业
拍照记录实验结果(包括对照)并进行分析。
第2篇:1普通生物学实验教案
实验一:线粒体和液泡系的超活染色与观察
【课前预习】
1.什么是液泡系?
2.为什么不能用一种活体染料同时观察多种细胞器?
【目的要求】
1.观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布 2.了解细胞和细胞器的超活染色技术
【基本原理】
线粒体是细胞内一种重要细胞器,细胞的各项活动所需要的能量,主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B(Janus green B)是线粒体的专一性活细胞染色剂,毒性很小,属于碱性染料,解离后带正电,由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色,从而使线粒体显色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。
中性红对液泡系的染色具有专一性,将活细胞中的液泡系染成红色。
【实验用品】
1.器材:显微镜、恒温水浴锅、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸
2.试剂:Ringer 液、1/5000 詹纳斯绿B、1/3000 中性红
3.材料:人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦(或绿豆)幼根根尖
【方法步骤】
1.线粒体的超活染色与观察
1)口腔上皮细胞线粒体的超活染色:1/5000 詹纳斯绿B1-2 滴,口腔上皮细胞(牙签刮取),载玻片于37℃恒温染色10-15min,显微镜下观察。
2)洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察:1/5000 詹纳斯绿B 溶液1-2 滴,洋葱鳞茎内表皮,载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min,显微镜下观察。2.小麦(或绿豆)幼根根尖液泡系的中性红染色观察
小麦(或绿豆)幼苗根尖(1-2cm)纵切面切片,1/3000 中性红溶液1 滴染色5-10min,载玻片于37℃恒温水浴,盖上盖玻片压扁根尖,显微镜下观察。【实验结果】
口腔上皮细胞的线粒体分布 洋葱内表皮细胞线粒体分布 植物根尖液泡的中性红染色
【实验报告】
1.绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。2.绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与分布并简要分析。
实验二 人类细胞中巴氏小体的观察
【课前预习】
什么叫巴氏小体? 【目的要求】
1.了解X染色体失活假设及剂量补偿效应的机制; 2.学习人类性染色质的检查方法。
【基本原理】
巴氏小体(Barr小体)又称X小体:M.l.Barr 等首先发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体,而雄猫没有,故称巴氏小体;由于这个小体与性别及X染色体数目有关,故称X小体(X染色质)。正常女性的两条X染色体在间期一条保持代谢活性,与常染色体一起进行正常活动,另一条DNA复制较晚,呈异固缩状态,没活性,形成X染色质。该失活的染色体在形态学上呈异染色体(即DNA螺旋压的很紧),染色深而致密,呈现三角或椭圆形小体,紧贴核膜内缘,大小约1~1.5 µm,数量为x染色体数减一(特例XXY,XXX核型)。
失活的染色体是随机的,失活状态使得雌性个体两个染色质所携带的两份基因的遗传效应与雄性个体一个X染色体所具有的一份基因的遗传效应基本相当,达到一种剂量补偿效应,是维持雌雄两性生物基因表达一致所特有的遗传效应。
【实验用品】
1.材料:口腔粘膜细胞 2.器材和仪器:显微镜;3.试剂:固定液(甲醇:冰醋酸=3:1);改良的苯酚品红(或1%硫堇)染液等。
【方法步骤】 1.取材
口腔粘膜细胞:受检者清水漱口数次,用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜,原位刮2~3次,第一次舍去,第2,3次分别涂于干净载玻片上,将刮取物在载玻片上涂片,晾干。
2.固定
将制片置于新配置的甲醇:冰醋酸固定液(3:1)中20min;往载玻片依次滴加95%,70%,50%乙醇及蒸馏水,每次2-3 min;滴加5mol/l盐酸水解约5s;蒸馏水(缓水流)漂洗2-3次,每次10-15 s。
3.染色、制片
在染色缸中染色10~20min(勿干),细水洗去染液,晾干即可镜检。
4.镜检(油镜观察)观察与计数
(1)形态
(2)计数:选择核较大,核质颗粒少,染色均匀清晰、核膜完整的细胞核进行计数,每份标本至少计数50个细胞中X染色质出现得概率。临床指标:正常值男性为0~3%,女性为20%以上。
【实验结果】
【注意事项】 漱口要干净,在镜检前要洗净载玻片、盖玻片以及显微镜镜头。
【实验报告】
1.绘制巴氏小体的形态。2.统计巴氏小体出现的概率。
实验三 减数分裂染色体行为的分析
【课前预习】
1.减数分裂各时期的形态学特点是什么?
【目的要求】熟悉减数分裂各时期的形态学特点,加深对减数分裂遗传学意义的认识;2 学习减数分裂制片方法,了解动植物生殖细胞的形成过程。
【基本原理】
(一)减数分裂是一种特殊的有丝分裂形式,仅发生在有性生殖细胞(如配子:雌配子和雄配子, 卵细胞和精子)形成过程中的某个阶段.(二)减数分裂的特点: 1 连续进行两次核分裂, 染色体只复制一次, 结果形成4个核, 每个核只含有单倍体的染色体, 即染色体数目减半;2 前期特别长, 而且变化复杂, 包括同源染色体的配对, 交换, 分离等.(三)减数分裂的过程: 减数分裂I:同源染色体分离
前期I: 持续时间较长
细线期: 染色体呈细的染色线,其上分布很多染色粒,形似念珠;
偶线期: 同源染色体开始配对, 不易与细线期绝对分开
粗线期: 同源染色体完成配对,染色体明显缩短变粗,双线期: 配对的同源染色体开始分离,染色体图像呈现纽花状
终变期: 染色体缩的更短,呈V, O, 8和X形状,均匀分散,利于计数
中期I 各个二阶体(四分体)排列在赤道面上
后期I 同源染色体分开,移向两极
末期I 移动到两极的染色体解旋恢复到染色质状态 减数分裂II:姐妹染色体分离
(同有丝分裂)中间期: 时间短,因物种而异 前期II:时间短,同末期I 中期II:染色体排列在赤道面上
后期II:姐妹染色体分离并移向两极
末期II:移动到两极的染色体解旋恢复到染色质状态
(四)植物花粉减数分裂
植物花粉形成过程中,花药中某些细胞分化成小孢子母细胞(2n),每个小孢子母细胞(2n)减数分裂后,产生4个小孢子(单核花粉,n,单倍体)
【实验用品】
1.材料:蚕豆花蕾(2n=12)2.器材和仪器:显微镜、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、量筒、滴瓶、切片架、切片盒、15cm培养皿、小培养皿、广口瓶、吸水纸。
3.试剂:甲醇、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醇、树胶、改良苯酚品红染色液。
【方法步骤】
(一)取材固定 取材的时间及材料大小必须十分恰当,才能获得更多的花粉母细胞分裂相,以供观察。
蚕豆现蕾后,于上午7~9时摘取茎顶幼小花序,将周围小叶和苞叶去掉,留长约1mm 左右的花苞,放入内装有卡诺氏固定液的广口瓶中,固定3~24小时,转入70%酒精中置冰箱内保存。(二)制片观察。剥开已固定好的花蕾取出花药,放于载玻片上;在花药上加一滴改良的苯酚品红染色液,染色10min,边染色边用解剖针剥开花药; 3 加上盖玻片,再把片子放在粗滤纸下,用拇指适力压下,使材料分开,并把周围的染色液吸干;放在显微镜下油镜观察
调节光亮度→低倍镜(10×10)观察(粗调,细调)→高倍镜(40×10)观察→油镜观察:在高倍镜下找到清晰的图像(确定视野),提升聚光镜,在标本中央滴一滴香柏油,使油镜(100×10)镜头浸入到香柏油中,细调至看到清晰图像为止。
用后复原:观察完毕,上悬镜筒,先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后沾取少量的二甲苯镜头上的残留的油,最后用擦镜纸擦去镜头上的二甲苯,后将镜体复原。
【实验结果】
1.绘制终变期、中期I、中期II、后期I、后期II细胞图像。【注意事项】
1.怎样区分各个时期?如中I、中I I,后I I、后I ?
【实验报告】
1. 绘制终变期、中期I、中期II、后期I、后期II细胞图像。2. 减数分裂的细胞与有丝分裂的细胞有何不同?
第3篇:实验生物学试题
2008《实验生物学》期中考试试题
请从下列试题中选择5道题进行回答。并写上主讲教师的名字。多答无效。
1.钟杨
从某个新近测序的基因组中发现了一个候选基因,需要进一步预测其功能并鉴定其是否为某个基因家族的成员。试用框图给出相关的生物信息学方法及步骤。
2.王纲
1.在荧光定量PC实验中,如何才能做到绝对定量?
2.对于绝对定量的real timePCR,有必要设内参吗?
3.简述几种实验方法来确定一个作为内参的基因不会因为你的实验条件所改变。
3.廖侃
蛋白质A是细胞内的一个信号分子,可以结合酪氨酸磷酸化蛋白质,它有三个结构域:一个结合酪氨酸磷酸化蛋白质结构域、一个磷酸化位点结构域和一个结合蛋白质B的结构域,并且能独立表达出有功能的结构域。蛋白质A本身可以被受体酪氨酸激酶磷酸化,磷酸化的蛋白质A与蛋白质B的结合能力下降。蛋白质B也能被酪氨酸磷酸化,但其只有在A存在时才磷酸化,而A本身在任何时候都不具有激酶活性。磷酸化位点都为已知。根据以上条件提出蛋白质间相互作用以及被磷酸化调控的模型。模型不得自己增加条件,并且必须符合以上所有条件。根据你的模型设计实验并加以证明。
要求:
1、不包括蛋白质单分子技术类的方法。
2、每一个证明实验必须用两种或两种以上的不同方法加以证明(如分子筛、超离心、SDS电泳为三种不同的测量分子量的方法)。
3、模型用示意图表示并附文字说明。
4.肖华胜
请简述基因芯片的原理及在系统生物学中的应用,并设计一个用基因芯片研究肿瘤分子分型的实验方案。
5.罗振革
设计实验分析蛋白 A对蛋白B在细胞内定位的影响。
6.肖保国
简述流式细胞仪和显微镜检查的区别,双染时荧光素选择的原则,细胞表面染色和胞浆染色的不同之处和具体操作时应该注意的事项。
7.费检
在进行小鼠基因剔除实验中,常用129小鼠的ES细胞和C57小鼠的囊胚,请说明有什么好处和缺点?
第4篇:提交 细胞生物学实验教案汇总
细胞生物学实验
Cell Biology Experiment
目 录
1.显微镜的结构及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定 2.液泡系和线粒体的活体染色 3.叶绿体的分离与观察
4.DNA的细胞化学——Feulgen反应 5.多糖的显示——PAS反应
6.细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示 7.细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术 8.植物原生质体的制备与融合 9.蚕豆根尖微核试验 10.膜的通透性
11.血细胞的分化和不同类型血细胞的观察
实验报告要求
1.注意页面四边留白,不要挤到页边!2.抬头填写完整。
3.注意事项自己总结,不要抄袭!4.组长检查后上交存档。
生物绘图注意事项
1.2H 以上绘图铅笔削尖、绘图橡皮、直尺
2.边看显微镜边按视野中实际情况绘图,以精确为主,不能艺术加工。
3.应找到最典型、最能说明绘图目的的物像来绘图。先轻勾出轮廓,检查无误后,再以准确清晰的线作最后描绘。
①实线表示轮廓,虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓,线粗细应均匀有规律
②圆点的疏密表示明暗、凹凸(越暗的地方点越多)点点时笔尖直立,点大小、疏密要均匀、整齐、浑圆,不能像“,”。
4.用尺向右侧引出水平指示线,线右端平齐字注在右侧。图下方写上所画图的名称及放大倍数。图的右侧和下方需写文字说明,所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。
5.一幅图只要详细画出部分结构,其余勾画出轮廓即可。
规范
不规范
实验一 普通显微镜的使用及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定
一、实验目的1.熟悉普通光学显微镜的基本构造和性能,掌握使用方法。2.了解细胞的一般形态和基本结构。
3.掌握显微测微尺的使用,对细胞大小有一直观认识。4.了解鉴定死活细胞的方法。
二、实验原理
1.显微测微尺的使用
镜台测微尺:表示绝对长度,长1 mm,分成100小格,每小格为0.01mm。不被用来直接测量,而是用它来校正目镜测微尺,故其质量对所测微体影响极大。
目镜测微尺:是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的圆形玻璃片,标尺长10毫米、分为100格。需要镜台测微尺校正为绝对长度再测定细胞大小。
2.死活细胞鉴定:台盼蓝是一种低毒的活体染色剂,只能透过质膜受损的细胞或死细胞。
三、实验用品 1.试验材料:
洋葱内表皮细胞
口腔上皮细胞、(人的口腔上皮细胞是扁平、多边形的,形状不很规)
2.试剂
0.2%台盼蓝溶液 3.仪器
测微尺(2套)、普通光学显微镜、刀片、镊子、玻璃滴管、吸水纸、牙签。
四、试验方法
一、细胞死活的鉴定
0.2%台盼蓝染色5-10分钟后进行观察。
二、细胞大小测量
1)测量时,镜台微台尺换成样本,2)目镜测微尺来测量细胞的大小
3)改变显微镜的放大倍率,则需对目镜测微尺重新进行标定。
三、细胞形态的观察
五、注意事项
取口腔黏膜上皮细胞注意的问题
1.口腔上皮细胞主要分布在口腔两侧颊部。用消毒牙签的钝端,在漱净的口腔任意一侧的颊部,轻轻刮几下。
2.取材前,口腔一定要用清水漱净,去除口腔内的食物残渣。
3.用方签在口腔壁上轻轻刮动,不要刮在牙缝里,因为牙齿上刮下来的是食物碎屑,不是口腔上皮细胞。
六、作业
1.绘制口腔黏膜上皮细胞及洋葱内表皮细胞图(2-3个细胞)
2.列表写出洋葱内表皮细胞长轴、短轴长度,并计算平均值。(取3个细胞)3.取口腔黏膜上皮细胞注意的问题 4.生物绘图注意事项
实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察
一、实验目的1、了解细胞和细胞器的超活染色技术。
2、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的形态、数量和分布,了解植物细胞液泡系的发育过程。
二、实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内,染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里,达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色,它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是染料的电化学特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用,应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用,可能因为它具有溶解在类脂质的特性,易于被细胞吸收,Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞内重要的细胞器,线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶能使詹姆斯绿B保持在氧化状态,呈现蓝绿色从而使线粒体显色,而细胞质中的染料被还原成无色。液泡 5
是细胞内浓缩产物的主要场所,有十分重要的功能。中性红是液泡的特殊染色剂,将液泡染成红色。在活细胞中,细胞质和细胞核不着色。如果细胞死亡,染料会弥散开来,使核着色。
三、实验用品
(一)器材
显微镜、恒温水浴锅、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸等。
(二)试剂
1、Ringer 溶液 生理盐水、缓冲液
氯化钠0.85g(变温动物用0.65g);氯化钾 0.25g ;
氯化钙 0.03g ;蒸馏水100ml2、10%、1/3000中性红溶液
称取0.5中性红溶于50ml Ringer溶液,稍加热(30-40度)使之很快溶解,用滤纸过滤,装入棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力。
临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29mlRinger溶液混匀,装入棕色瓶备用。3.1%、1/5000詹姆斯绿B溶液
称取50mg詹姆斯绿B溶于5ml Ringer溶液中,稍加 微热(30-40度)使之溶解,用滤纸过滤后,即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液,即成1/5000工作液,装入瓶中备用。最好现用现配,以保持它的充分氧化能力。
(三)材料
人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦幼根根尖。
四、实验方法
(一)线粒体的超活染色与观察
1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
载玻片→ 37℃水浴锅的金属板→滴两滴詹纳斯绿B染液
牙签→从口腔粘膜刮取上皮细胞→放入载玻片染液→染色10-15分钟(注意不可使染液干燥, 必要时可再加滴染液)→盖上盖玻片用吸水纸吸去四周溢出的染液→观察 2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色
载玻片→撕取一小片洋葱鳞茎内表皮滴→一滴詹纳斯绿B染液→染色10-15分钟 吸去染液→加一滴Ringer液,注意使洋葱内表皮展平→盖上盖玻片→观察
(二)液泡系的超活染色与观察
刀片→小麦幼苗根尖→切一纵切面→中性红染色5-10分钟
吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→镊子轻轻下压盖玻片→观察 五.实验结果
在小麦根尖细胞制片中,可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡,这是初生的幼小液泡。然后,由生长点向延长区观察,在一些已分化长大的细胞内,液泡的染色较浅,体积增大,数目变少。在成熟区细胞中,一般只有一个淡红色的巨大液泡,占据细胞的绝大部分空间,将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。六.注意事项
1、詹姆斯绿B溶液现用现配,以保持它的充 分氧化能力。
2、实验中速度要快,以免组织细胞死亡。
七、作业.画出你所观察到的线粒体和液泡的图像.2 .总结实验成功或失败的原因.实验三 叶绿体的分离与观察
一、实验目的通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。
二、实验原理
细胞器分离的过程包括两个主要阶段:破碎细胞和细胞组分的分离。叶绿体的分离采用在等渗溶液中进行组织匀浆、分离。叶绿体的分离采用差速离心或密度梯度离心法进行。差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低,让较大的颗粒沉降到管底,小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀,改用较高的离心速度离心悬浮液,将较小的颗粒沉降,以此类推,达到分离不同大小颗粒的目的。差速离心的分辨率不高,沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前的粗制品提取。
三、实验用品
1.材料: 菠菜叶片
2.试剂:蒸馏水,0.35mol/L氯化钠溶液
3.仪器:普通离心机、天平、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、离心管、吸水纸等
四、实验方法
1.菠菜叶片(去叶脉)3g → 0.35mol/L氯化钠15ml→研磨(冰浴)→匀浆过滤(6层纱布)→滤液在1000rpm离心2min→弃沉淀,上清液3000rpm离心5min →去上清液→沉淀为叶绿体(混有部分细胞核),用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮 →滴片观察
2.取叶绿体悬液1滴置于载玻片上,加盖玻片后用用普通光学显微镜观察叶绿体的形态结构 3.菠菜叶手切片观察
新鲜菠菜叶,刀片切出一斜面置于载玻片上,滴加1-2滴NaCl溶液,盖上盖片,显微镜下观察。用镊子摄取或刀片刮取新鲜菠菜叶片叶肉,滴加1-2滴NaCl溶液,作临时装片。
五、实验结果
1.普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄型,高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色颗粒,即基粒。
2.菠菜叶手切片在普通光镜下可以看到三种细胞:表皮细胞、保卫细胞、叶肉细胞。叶肉细胞呈长方形或类方形,内含大量带有绿色的叶绿体颗粒。另外,视野下还可见到大量散在的点状或类圆状叶绿体颗粒。
3.红辣椒细胞中有许多红色小颗粒,这就是杂色体。杂色体分散在细胞质中。
六、注意事项
1.叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
2.分离过程最好在0-5℃的条件下进行;如果在室温下,要迅速分离和观察。3.离心机使用:离心管要平衡
七、作业
1.根据显微观察结果,绘制菠菜叶的结构模式图。
实验四 细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术
一、实验目的掌握植物细胞内细胞骨架的光学观察方法,了解细胞骨架在细胞内的分布特点。
二、实验原理
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构,按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞,可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提,而细胞骨架系统的蛋白质被保存,再用考马斯亮蓝R250染色,使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
Triton X-100:是非离子型表面活性剂(去污剂)。适当浓度的Triton X-100处理细胞时,可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提,但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存。这样,使细胞骨架图像更清晰。
考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料,它可以使各种细胞骨架蛋白质着色,并非特异地显示微丝,但是由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,例如微管;还有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,因此我们看到的主要是微丝组成的应力纤维(微丝束),直径约40nm左右。
戊二醛能固定,较好的保存细胞骨架成分。
M-缓冲液: 稳定F-肌动蛋白使得细胞骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张,便于观察。磷酸缓冲液(PBS):含有生理盐水,可使细胞不被破坏,能保持原有状态下的结构。
三、实验用品 1.实验材料
新鲜洋葱鳞茎的内表皮。2.实验器材
普通光学显微镜、10mL小烧杯、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、载玻片、盖玻片、擦镜纸、PH 计、水浴锅。3.试剂:
M-缓冲液、磷酸缓冲液(PBS)、3%戊二醛、1%Triton-100、0.2%考马斯亮蓝R250
四、试验方法
21.用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约0.5cm大小若干片),置于1.5ml离心管中,加入PBS(1.5mL左右),使其下沉(10min左右)。2.吸去缓冲液,用1%Trion X-100处理15-20min。3.吸去Trion X-100,用M缓冲液洗3次,每次5min。4.用3%戊二醛固定30min。
5.PBS(1.5ml左右)洗3次,每次3min,滤纸吸去残液。6.0.2%考马斯亮蓝R250染色至少30min。
7.蒸馏水洗涤2次,然后将样品置于载玻片上,加盖玻片,在普通光学显微镜下观察。8.选取观察效果好的制作永久切片于脱水剂中每级5-10min,第一滴阿拉伯树胶封片。
五、实验结果
观察:镜下可见洋葱表皮细胞轮廓,微丝束呈深蓝色。转换高倍镜观察,转动微调,可见细胞骨架的立体结构。
六、注意事项:
1.撕取洋葱鳞茎内表皮不可带茎肉,样本要展开铺平。
2.去垢时间不要超过30min。
3.染色时间需掌握好,必要时可分别设不同染色时间比较。
4.由微丝组成的应力纤维(张力纤维)是一种动态结构,细胞充分贴壁铺展时纤维挺直、丰富;反之,细胞收缩变圆,应力纤维弯曲,甚至部分解聚消失而显稀少。
七、作业
绘出植物细胞骨架微丝的分布图。(2-3个细胞)补充:
① 6mmol/L PBS(pH6.8)A液:NaH2PO4·2H2O 936mg/1000ml B液:Na2HPO4·12H2O 2148mg/1000ml
工作液:A液53.7ml + B液46.3ml(用NaHCO3调pH值至6.8)② M缓冲液(pH值7.2)咪唑 50mmol/L KCl 50mmol/L MgCl2 0.5mmol/L EGTA 1 mmol/L EDTA 0.1 mmol/L 巯基乙醇1 mmol/L 甘油4 mmol/L 加蒸馏水至1000ml,用1mol/L HCL调pH值为7.2。
③ 1%TritonX-100: TritonX-100 1ml M缓冲液99ml ④ 0.2%考马斯亮蓝R250染液: 考马斯亮蓝R250 0.2g 甲醇 46.5ml 冰醋酸 7ml 蒸馏水 46.5ml 5.3%戊二醛
25%戊二醛12ml PBS(2液)88ml ⑤脱水剂 50%乙醇 70%乙醇 95%乙醇 100%乙醇 二甲苯
实验五 DNA的显示—— Feulgen反应
一、实验目的1、了解Feulgen染色反应原理;
2、掌握Feulgen染色的方法,观察染色结果。
二、实验原理
根据DNA经盐酸水解后,打开了嘌呤碱基和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成紫红色的化合物。所以凡有DNA的部位,就呈现为紫红色。
Feulgen反应是特异性显示DNA的最经典方法,即可进行DNA定位显示,又可用显微分光光度计进行定量分析。Feulgen反应对组织中DNA的检测具有高度专一性。组织中除DNA外还有多糖、RNA和其他自由醛基可以被盐酸酸解掉。
三、实验用品
四、实验方法
①取小麦根尖和洋葱内表皮(绿豆大小)浸入预热至60℃的1N HCl中水解,时间10 min。10
②蒸馏水洗后,转入Schiff液中避光染30 min,待根尖变为深红色; ③在新配亚硫酸水中洗3次,每次 1 min;
④自来水洗 5 min,在载玻片上切下深红色根尖备用; ⑤制片镜下观察,根尖镊子捣碎压片。
五、注意事项
六、作业
绘图描述所观察到的试验结果。
实验六 多糖的显示——PAS反应
一、实验目的通过PAS反应,了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。
二、实验原理
PAS反应是显示多糖的最经典、也是最直接的细胞化学方法。用具有强氧化作用的过碘酸处理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成两个游离的醛基,醛基与Schiff试剂结合可形成紫红色的化合物,颜色深浅与多糖含量成正比。单糖易被抽提掉,多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纤维素。
三、实验用品
1.材料:马铃薯块茎
2.试剂:0.5%高碘酸、schiff试剂、亚硫酸水、70%酒精 3.器材:显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、水浴锅
四、实验方法
1、取马铃薯块茎切成薄片,浸入过碘酸溶液10分钟;
2、用70%的酒精冲洗1次;
3、将薄片放入Schiff试剂中20-25分钟;
4、在新配亚硫酸水中洗3次,每次 1 min;
5、蒸馏水洗片刻;
6、将薄片放在载玻片上吸去水分,加上盖玻片,镜下观察。
五、注意事项
按上述操作,细胞中水溶性糖类已丧失,被染色的是不溶性的碳水化合物。
六、作业
绘制实验结果,并描述。
实验六 细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示
一、实验目的1.掌握细胞内酸、碱性蛋白的鉴别方法; 2.了解酸、碱性蛋白在细胞内的分布情况。
二、实验原理
蛋白质是一种两性电解质,在碱性环境中,蛋白质带负电,在酸性环境中,蛋白质带正电。所以,利用各种蛋白质在不同ph下,因等电点不同而产生的与固绿染液(一种弱酸性染料它对碱性物质的亲和力强)结合能力的差异。对细胞中的蛋白质染色,可使细胞内的酸性蛋白(等电点偏向酸性)和碱性蛋白(等电点偏向碱性)分别显示。总体蛋白pI4.7-6.75,组蛋白pI8.5。试验用酸性染料pH2.2,碱性染料pH8.0 核酸的存在会影响实验结果,用三氯醋酸处理可提出核酸。
三、实验用品
1、试验材料
洋葱鳞茎内表皮或根尖
2、试剂
10%福尔马林、5%三氯醋酸、0.1%酸性固绿染料(酸染)、0.1%碱性固绿染料(碱染)
3、器材
显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、吸水纸
四、实验方法
1.材料固定 洋葱鳞茎内表皮若干片,10%福尔马林固定液中固定15min,蒸馏水洗2次。2.抽提核酸 5%三氯醋酸中90℃,15min,蒸馏水洗数次(3min以上)以冲去痕迹的三氯醋酸。3.染色
①一张片滴加0.1%碱性固绿(pH8.0)中染色5~10min。
②另一张片滴加0.1%酸性固绿(pH2.2)中染色5~10min(视染色深浅而定)。
蒸馏水冲洗(3min),盖上盖片镜检。
五、实验结果
用PH2.2酸性固绿染液染色结果,细胞中蛋白质均被染成绿色,此即总体蛋白在细胞内的分布。总体蛋白-碱性蛋白=酸性蛋白。
用pH8.0碱性固绿染液染色结果,只有细胞核内染色质被染绿色(或浅蓝色),此即碱性蛋白在细胞内的分布。
六、注意事项
使用三氯醋酸处理的目的?
用5%TCA提取DNA是该实验中的关键。DNA必须被提取,以使染色质的负电荷下降,用热TCA提取核酸后,固绿在碱性pH下,碱性蛋白可以选择性地被染色,如未被提取,不能染色,或整个切片染成蓝绿色,水洗或进入酒精即褪色。
七、作业
1、绘制酸、碱性蛋白在细胞内的分布图。
2、总结本次实验的得失。
实验八 植物原生质体的制备与融合一、实验目的1.学习植物原生质体的分离制备技术,观察原生质体形态。2.学习细胞融合技术,观察融合细胞的形态及变化。
二、实验原理
除去植物细胞壁的裸露细胞,称为原生质体,是开展基础研究的理想材料。植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成,常用酶解法分离原生质体,其原理是使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分,除去细胞壁。
细胞融合又称细胞杂交指离体条件下用人工的方法把不同的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。许多化学、物理学和生物学方法可诱导原主质体融合,现在被广泛采用并证明行之有效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法、高Ca高pH法和电融合法。PEG作为一种高分子化合物,20~50%的浓度能对原生质体产生瞬间冲击效应,原生质体很快发生收缩与粘连,随后用高Ca高pH法进行清洗,使原生质体融合得以完成。
三、实验用品
1.器具:显微镜、离心机、离心管、剪刀、镊子、吸管、小培养皿、载片、盖片、300目滤网。
2.试剂:酶混合液、洗涤液、20%蔗糖液、PEG溶液、高钙高pH溶液
(1)酶混合液(9CPW):
(2)洗涤液(9CPW)1%纤维素酶
pH 5.6 0.5-0.7%果胶酶
27.2 mg/L KH2PO4 101.0 mg/L KNO3 1480.0 mg/L CaCl2·2H2O 246.0 mg/L MgSO4 0.16 mg/L KI 0.025 mg/L CuSO4 9% W/V甘露醇
500mg/L MES pH 5.6(3)PEG融合液(pH 5.6)40% PEG(MW 1000-6000)0.3 mol/L葡萄糖 3.5mmol/L CaCl2·2H2O 0.7mm0l/L KH2PO4(4)高钙高pH溶液(pH 10.5)0.1mol/L CaCl2·2H2O 0.1mol/L甘露醇 0.05mol/L Tris 3.材料:菠菜、韭菜叶片
四、实验方法
1、分离原生质体
① 撕叶下表皮
② 酶解 将撕去下表皮的叶片剪成0.5mm宽小块,放在盛有5mL酶液的小培养皿或带盖三 角瓶中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25-28℃下酶解60-90分钟。可镜检有较 多原生质体后停止。
2、收集纯化
①用300目网过滤除去未完全消化的残渣。
②酶解液转移至10mL离心管中,配平,以800rpm离心5分钟以上,使原生质体沉降。移液管吸上清,剩下原生质体及残渣于管底。
③加入3ml CPW洗涤液,轻轻吹打均匀,相同条件下离心2-5分钟,弃上清,以彻底去除酶液。
④加入少量CPW洗涤液,轻轻吹打均匀,用注射器向离心管底部缓缓注入20%蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液。
⑤以600rpm离心10分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体,注射器针头轻轻插入离心管底部吸取碎片和蔗糖溶液,再吸去上清。
3、制备效果检测(1)血球计数板计数(2)原生质体活力测定
形态识别(完整、饱满、颜色鲜艳)
中性红染色(液泡变红)
台盼蓝染色(不能显色)
观察10个视野计算:
存活率=(活性原生质体/原生质体总数)×100%
4、原生质体融合
(1)取原生质体液两滴,间隔5mm滴于载玻片上,静置8—10分钟,使原生质体沉降。
(2)在两液滴之间滴加一滴40%的PEG溶液,使三液滴相连(可转动载玻片使其混匀)室温下(15-20 ℃)静置5-10分钟,观察原生质体聚集(粘连)现象。
(3)滴加高钙高PH洗液,转动载玻片使其混匀,观察原生质体融合过程。
五、作业
1.按镜下观察绘制2-3个原生质体。2.计算原生质体浓度和存活率。
3.描述原生质体融合过程。
实验九 蚕豆根尖微核检测技术
一、实验目的1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点,2、学习植物根尖细胞的微核检测技术。
二、实验原理
微核试验(The micronucleus test,MNT)是以动植物为材料,采用细胞生物学手段,观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。微核是指位于细胞质中独立于主核、直径小于主核,完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核。是真核生物细胞中的一种异常结构,它是由于细胞受到损伤后,由细胞分裂过程中丧失着丝粒的染色体断片或落后染色体产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
蚕豆根尖细胞微核技术已发展的相当成熟,具有较高的灵敏性,作为检测化学品遗传毒性的方法,得到了广泛应用。而且在测定监测淡水污染物和检测化学诱变剂的研究已列入国家生物监测技术规范(水环境部分),并推广应用于大气、废水、土壤等的致突变活性检测。
三、实验用品 1.材料:蚕豆 2.器材
显微镜、恒温培养箱、纱布、镊子、载玻片及盖玻片等。3.药品
盐酸(5mol/L)、70%乙醇、卡诺固定液(用乙醇和冰醋酸以3:1(v/v)混合配制)、石炭酸品红、硫酸铜、待测液。
四、实验步骤
1、浸种催芽
将实验用蚕豆按需要量放入盛水烧杯中,在25℃下浸泡24~48小时,此间至少换水两次,所换水应25℃预温。
种子吸胀后,用纱布松散包裹置瓷盘中,保持温度,在25℃温箱中催芽12~24小时。
待初生根长出2~3mm时,再取发芽良好的种子,放入铺满滤纸的瓷盘中,25℃继续催芽,经约36-48小时,大部分初生根长至1~2cm左右,此时可用来进行实验。
2、根尖染毒:
选取初生根生长良好,根长一致的6~8粒种子,放入盛有待测液的培养皿中,阳性检测采用200mg/L硫酸铜,对照用蒸馏水处理,处理时间6-24h,处理液浸没根尖。
3、恢复培养:处理后的根尖用自来水浸洗3次,每次2~3min,洗净后在蒸馏水中恢复培养24h。
4、固定:切取1cm左右的根尖,用卡诺氏固定液固定24h后弃去固定液,固定后的根如不及时制,可换入70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。
5、酸解:用蒸馏水浸洗固定好的幼根2~3次,每次5分钟,吸净蒸馏水,加入5mol/L盐酸将幼根浸没,室温下酸解10min,幼根软化即可,弃去盐酸,漂洗根尖2~3次,每次1~2分钟,彻底洗净盐酸。
6、染色:截下1-2mm长的根尖,滴加适量的石炭酸品红染液,染色10min,加盖玻片,压片观 15
察。
五、注意事项
1、培养蚕豆时需勤换水
2、处理蚕豆时要将根部浸没于处理液中
3、固定液要现配现用
六、实验结果
污染指数PI值评价水质标准表
污染指数PI值 水质污染等级
基本无污染 0 ~ 1.5 轻污染 1.5 ~ 2.0 中污染 2.0 ~ 3.5 重污染 3.5以上
七、作业
绘图、计算微核千分率和污染指标。
实验十 细胞膜的渗透性
一、实验目的1.了解溶血现象及其发生机制。
2.了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。
二、实验原理
细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障,是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。小的、亲脂性的、非极性分子(如O2、CO2、N2、苯)容易溶解于脂双层,可迅速透过脂双层。小的、不带电荷的极性分子(如水、脲、甘油等)如果足够小时,也能很快透过脂双层;大的、不带电荷的极性分子(如葡萄糖,蔗糖等)以协助扩散或主动运输进入细胞;对于带电荷的分子或离子,由于这些分子的电荷及高的水化度,因此不管多小,都很难透过脂双层的疏水区,它们要通过载体介导的主动运输方式跨膜运输。
将红细胞放在低渗盐溶液中,水分子大量渗到细胞内,可使细胞胀破,血红蛋白释放到介质中,由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中,由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同,有的溶质可进入,有的溶质不能进入,进入红细胞的溶质能提高红细胞的渗透压,使水进入红细胞,引起溶血。由于不同溶质透入速度不同,溶血时间也不同,因此,发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料,将其放入不同的介质溶液中,观察红细胞的变化。
三、实验用品
1.材料: 鸡血溶于含有抗凝剂的等渗液中(肝素钠0.2mg/mL,一般范围在 0.01-0.2mg/mL;等渗液为0.85% NaCl)2.器材:
试管,试管架,滴管,载玻片,盖玻片,光学显微镜。3.试剂:
低渗溶液:0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖;
等渗溶液:0.85% NaCl、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇。10% TritonX-100、2%TritonX-100。
四、实验步骤
1、制备血液稀释液
①抗凝剂的制备:首先称取1克肝素钠粉末,然后加入0.17 M NaCl溶液ml(1∶10的比例),混合均匀,制成肝素抗凝剂。
②血液稀释液的制备:鸡翼下静脉取新鲜血液,按比例(肝素抗凝剂:血液=1∶10)混合均匀,配制成经肝素抗凝的血液。
③按比例(经肝素抗凝的血液∶0.17 M NaCl 溶液=1∶10)混合均匀,形成一种不透明的红色液体。
2、低渗溶液溶血现象观察:
取试管一支加蒸馏水3ml和稀释的鸡血1滴或2滴轻混一下,然后静止注意观察溶液的颜色变化。结果:由于红细胞发生破裂,造成100%红细胞溶 血,使光线比较容易透过溶液,溶液颜色由浑浊的红色逐渐变透明,此即为溶血现象。记录下这个过程所要的时间。
3、鸡红细胞的渗透性记时比较
1)分别取2只试管,各加入3ml的0.85% NaCl、0.0085% NaCl和0.032mol/L葡萄糖 加入2-3滴血红细胞悬液;
2)分别取3只试管,各加入3ml的 0.32 mol/L葡萄糖,0.32 mol/L甘油,0.32 mol/L乙醇,加入2-3滴血红细胞悬液;
3)分别取2只试管,各加入3ml的10% TritonX-100、2%TritonX-100;加入2-3滴血红细胞悬液,观察反应现象。记下时间(自加入稀释血液到溶液逐渐由红色变为透明澄清,红血球全部溶血所需时间),填入表一的空格中。
4、溶血结果的判断
不溶血:液体分2层,上层浅黄色透明,下层红色不透明,镜检红细胞完好。不完全溶血:溶液混浊,上层变红色,镜检有部分红细胞破裂。完全溶血:液体变红而且透明,镜检发现细胞全成碎片。
5、显微观察
血液红细胞的观察滴一滴稀释的血液于载玻片上,盖上盖玻片。用光学显微镜观察细胞的种类、形状和颜色。
细胞破碎的观察在上一步的载玻片的一端滴加清水,在另一端吸水,并在显微镜下观察细胞的破裂。
五、实验结果
将观察到的现象记录,并进行分析。
编号
试
剂
是否溶血
时间
分析原因2 3 4 5 6
0.85% NaCl 0.0085% NaCl 0.32 M葡萄糖 0.32 M 甘油 0.32 M 乙醇 10% TritonX-100
六、注意事项
1.试管中有红细胞和测试溶液时,不应强力摇晃,以免造成人为的红细胞破裂。
2.取鸡血动作要非常迅速,否则鸡血会凝固。或者先把抗凝剂加入到烧杯中,再加入新鲜的鸡血,边加边震荡即可。
3.长时间在等渗溶液中,由于活细胞会产生代谢产物积累,也会产生溶血,试验时间不宜超过1h。
4.装不同试剂试管注意编号,吸管也要专用切勿混淆,以保证实验结果的准确性。补充:
一、细胞膜的功能
分隔形成细胞和细胞器,为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境,膜的面积大大增加,提高了发生在膜上的生物功能;
屏障作用,膜两侧的水溶性物质不能自由通过; 选择性物质运输,伴随着能量的传递;
生物功能:激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等;
物质转运功能:细胞与周围环境之间的物质交换,是通过细胞膜的转运功能实现的,其主要转运方式有四种,即单纯扩散、易化扩散、主动转运、入胞和出胞作用。
细胞膜的受体功能:受体是细胞识别和结合化学信息的特殊结构,其本质是蛋白质。
二、常用抗凝血剂包括:
1.非肠道用药抗凝血剂:如肝素;
2.香豆素抗凝血剂类:常用的有双香豆素、华法令和新抗凝等,通过拮抗维生素K使肝脏合成凝血酶原及因子Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ减少而抗凝;
3.抗血小板凝集药物:如阿司匹林,对血小板环氧化酶有抑制作用;
4.蛇毒溶栓剂:如去纤酶、抗栓酶和清栓酶,可溶解已形成的血栓使血管再通,从而起到抗凝血作用。
肝素的作用机理
肝素在体内、体外均有强大抗凝作用。与其带大量负电荷有关,可使多种凝血因子灭活。这一作用依赖于抗凝血酶III(antithrombin
III,AT
III)。At
III是凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα、Ⅹα等含丝氨酸的蛋白酶的抑制剂。它与凝血酶通过精氨酸-丝氨酸肽键相结合,形成At
III凝血酶复合物而使酶灭活,肝素可加速这一反应达千倍以上。
实验十一 血细胞的分化和不同类型血细胞的观察
一、实验目的1、学习掌握人血涂片和染色的方法。
2、了解各种血细胞的形态特征。
二、实验原理
瑞氏染色液主要染料由碱性美蓝和酸性伊红两种成分组成, 它们与细胞内的嗜酸性和嗜碱性的各种物质既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用, 各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样,因此使细胞呈现出不同的色彩.伊红和美蓝只能溶解在有机溶剂中,而滴在水中很快形成沉淀,所以染色液必须配成甲醇等有机溶液,临用时加到水或缓冲液中,才能在一定的环境下离解成有色的阴离子伊红和阳离子美蓝,而与细胞中的不同物质相亲和被染色。如滴加到水中很快发生沉淀,容易形成沉渣。
甲醇兼溶剂和起固定细胞两种作用。甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应。缓冲液作用:
染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBS的pH 一般在6.8,偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使pH恒定。缓冲液配制(pH6.4-6.8,弱酸性)。
A:红细胞,B:嗜酸性粒细胞,C:单核细胞,D:中性粒细胞,E:嗜碱性粒细胞,F:淋巴细胞
三、实验用品
显微镜、载玻片、采血针、75%酒精、消毒棉球、瑞氏染液、PBS、吸耳球。
四、实验方法
1.消毒 先按摩取血部位,使血流通畅;再用酒精消毒取血部位(如无名指指尖、耳垂)。2.取血 待酒精干后,刺破皮肤,使血自然流出,或挤压出血。取干净载片,让血滴在离载片一端中4~5毫米处,注意手指持握载片的边缘,勿触及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。必须两人密切配合,抓紧时间,一人取血,另一人迅速推片。
3.推片 这步最重要,但又不易推均匀。以左手拿该片的两端,迅速用右手取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端置于血滴前方,向后移动到接触血滴,使血液均匀分散在推片与载片的接触处,成一直线。然后使推片与载片呈30°~40°角,轻轻移动,然后由前向后推为一均匀的薄片。涂片推好后,迅速在空气中摇,使之自然干燥。
4.染色 将瑞氏染液(伊红-亚甲基蓝)滴在血膜上,至染液淹没全部血膜,染半分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液,加好后,立即用嘴将两液吹匀。混合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉,用吸水纸吸干,自然干燥后,即可观察。5.观察
五、注意事项
1.染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关。染液越淡,室温越低, 细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定。特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件。
2.染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净。冲洗时应用流水将染液冲去,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上。
3.判断染液是否起到了染色的作用,可在冲洗染色液前观察染液有无一层黄色的金属光泽,如果没有,则表示染色失败。
4.如染色太浅,可按照原来步骤重染。
六、作业
1.绘制自制血涂片中的各种血细胞(至少一种白细胞)。2.用简练的语言概括血液的主要成分和作用。
第5篇:普通生物学实验总结
普通生物学实验总结
短短一学期的实验课就这样结束了。我即将告别这段每周四晚上穿着白大褂来到小红楼的日子。回想过去的每一个实验,心中不免感慨万千。
还记得第一个实验画植物细胞时,就体会到了画画的弱点,经过了一个学习,只能说绘图还算及格,但离标准还有很大的差距,还需要更多的练习。也记得,在显微镜下观察导管时,把眼睛瞪得肿痛,仍然分不清,一遍遍调整实验条件,心里说不上的不安和烦躁……也记得,在解剖鱼类和青蛙的时候,因为动作不够敏捷,下刀不够准确而导致最后的鲜血模糊,但这一切的一切都是我们的实验成果,我们从中学到了许许多多,也让自己变得更加充实。
首先,我认为通过实验,我了解了大量的生物知识。不论是植物解剖,还是微生物繁殖,应该说通过普通生物学实验,我对生命科学形成了了一个尽管浅显,但是全方位多角度的了解。把这些知识作为一种常识应用在生活当中,我感到受益匪浅。
其次,进实验室让我的动手能力和自主实验能力得到了加强。有的时候穿得多麻烦,动手一点都不方便,但是通过不断的实验,我慢慢适应了实验的复杂性和困难性,初步了解了缜密的科学思维,理解了各种规程的道理,有了一个更严谨的实验态度。
同时,21世纪是生物科学的世纪,我们可以通过实验,激发对生物的兴趣,培养自己的创新意识,能在未来的社会中有一席之地。我希望能让自己从这里得到的心得,学习应用到其他的实验甚至是学习生活中去,扩充自己的知识,拓宽自己的视野,增厚自己的底蕴,加强自己的能力,不敢放言称自己要成为未来生物界中的一流人才,只能勉励自己成为一个不负众望的有用的人。
最后感谢朱老师、曾老师,以及实验室老师们为这门课、为我们所付出的心血。短短一个学期就这样过去,但我相信,在普通生物学实验中学到的,我将受用终生。
第6篇:初中生物学实验探讨
题
目
初中生物学实验探讨
学
院
专
业
年
级
学
号
姓
名
指 导 教 师
成绩
2012年9月12日
初中生物学实验探讨
摘要:
随着九年义务教育的深入实施,对学生进行实验教学,努力培养学生的动手能力,是中学教学的一项重大任务。初中生物学作为一门以实验为基础教学的课程,实验教学是其教学过程中的一个重要组成部分,也是达到初中生物教学的教学目标的基本方法和途径。生物学中的各个实验均关系着学生的生物学知识的培养,同时对学生的动手能力也是一种提高。因此,改善初中生物实验教学的教学方案,培养学生的动手能力和提高初中生物教学的效率,是当前生物教学的当务之急。本文通过初中生物教学中实验教学的现状进行分析,提出几点改善初中生物实验教学的现状,希望能为初中生物实验教学的改变提供一些参考意见。
关键词:初中生物;实验教学;改善;策略
Junior high school biology experiment discued
XIE Lingkun School of Life Science, Southwest China University, Chongqing 400715, China
Abstract: With nine years of compulsory education further the implementation of the students in the experimental teaching, and strive to cultivate students' practice ability, the middle school teaching is a major task.Junior high school biology as a door on the base of experiments teaching courses, experiment teaching is in the proce of its teaching is an important part of a junior high school biology teaching is to achieve the teaching goal, the basic method and way.Biology in each experiment are in relation to the students' understanding of the biology of culture, and at the same time to the student's beginning ability is also a kind of increase.Therefore, to improve the junior middle school teaching of biology experiment teaching plan, raises student's beginning ability and improve the efficiency of the junior high school biology teaching, is the urgent matter of the biological teaching.This paper through the junior high school biology teaching experiment teaching present situation to carry on the analysis, proposed some improving junior high school biology experiment teaching present situation, the hope for junior middle school biology experiment teaching change provides some reference opinions.Key words: junior high school biology;experimental teaching;improve;strategy
第一部分 文献综述
实验在初中生物学教学中处于不可缺少的地位,是生物学教学的重要方法,是生物教学的基础和重要内容。可以帮助学生获得知识、训练学生的科学方法,培养学生的初步研究能力、创新能力,最终实现学生科学素养的提升。目前,初中生物实验教学还存在一些问题,需要我们不断的改进,以提高生物实验教学的质量。国家义务教育规定,通过生物教学,在提高学生的实验能力的同时,培养学生的观察能力、思维能力和自学能力。由于初中生尚未接触具体的生物学知识。因此,学生的各方面都十分的欠缺,包括经验,实验能力等。而生物学实验作为认识生命运动的一种手段,因此,对学生进行合理的生物学教学,通过对学生理性的指导,培养学生的动手能力和组织思维能力,通过生物学实验教学的实施,提高学生的认知能力。因此,初中学校应该广泛开展生物的实验教学,并改善实验教学方法,使学生在实践中获得更多的知识。
生物实验教学中教师应采取有意识和无意识相结合,引导学生集中注意力进行科学地观察。启动学生通过现象揭示本质,使观察上升到理性认识的高度,规范化的实验操作是学生顺利、高效地完成实验的前提,对生物体的形态、结构、功能等有关知识的理解越深刻、越透彻,对所学知识就记得越牢,规范化的实验操作对学生养成科学的学习方法和为进一步学习和研究生物学奠定坚实的基础
第二部分 正文
一、初中生物实验教学存在的问题
由于受到应试教育的影响,再加上学校的管理体制、教师的教学理念、评价手段的滞后等诸多因素的作用,中学生物实验教学出现了比较多的问题。目标单一,大部分教师只关注学生的认知,忽视学生情感、价值观的培养。生物实验教学方法大多仍采用传统的教学方式,以演示实验和验证性实验为主。教师事先准备好实验材料、仪器、试剂,学生没有预习实验便进入实验室。教学流程一般都是遵循:教师讲解示范—学生模仿实验—小结实验结果。教师讲解实验原理、方法步骤、注意事项,学生按部就班,按实验教材依样画葫芦填写实验报告,完成实验。在实验过程中不注意引导学生观察,致使学生不注意观察和纪录实验现象,对课本上的结论深信不疑,缺乏起码的实事求是态度和质疑精神,实验效果不好。大部分的学生在实验过程中缺乏合作,不知道共同的努力找出问题的答案,出现问题就求助老师。这样的教学也使得学生的实验兴趣不高,认为实验过程中动不动手无所谓,缺乏必要的约束和有效的检验。
除此以外,由于初中生比较活泼,自我约束能力差,实验课堂难以组织。上实验课时,实验室简直就像自由市场,乱哄哄的,纪律非常不好,难以控制。而且有的学生上生物实验课没有什么想法,他们之所以喜欢生物实验课,只是觉得好玩。所以,上实验课时往往不能认真地按照要求进行操作、观察和思考。
二、改善初中生物实验教学的几点建议
针对初中生物实验教学中的种种不足的现状,改善生物实验教学教学方法,培养学生对生物的学习兴趣和实验动手能力,是培养学生综合素质的一项重要任务。下面就上述现状相应的提出几点关于改善初中生物实验教学的建议,为初中生物实验教学的改善提供一点参考。
改变教学观念,重新认识生物实验教学功能。在初中生物的实验教学中,无论是教师还是学生,都应该重新认识一下实验教学的重大作用。教师应该认识到,生物实验教学并不是生物课程的附属品,而是一门与其相辅相成的课程。初中生具有强烈的好奇心和动手做实验的欲望。因此,良好的实验教学,不仅能提高学生的实验动手能力,同时还能激发学生对生物的学习兴趣,提高教师在课堂教学的效率。
增加探究实验,提高学生对未知的探究能力。实验是一个对外界事物进行探究的过程,也是一个创造的过程。通过实验,可以获得很多意想不到的结果,许多科学家们的重大发现都是通过实验来获得的,并且他们预先都不知道结果会怎样。因此,在现阶段的生物实验教学方法是不符合要求的。改善实验教学方法,将验证性和演示性的实验改为探究性的实验,增加探究性实验在生物实验教学中的比例。
注重生物实验过程,结果只是参考。初中的生物实验教学,并不是为了让学生去发现什么重大的科学秘密,研究重大的科研技术等,而只是为了培养学生的各种思维能力和动手能力。针对现在的生物实验教学重视结果,忽略过程的现状,学生的能力并不能得到提高。因此,应重视生物实验教学中生物实验过程,让学生在实验过程中慢慢去体会实验的乐趣。同时,学生通过对实验过程中每一环节的重视,不仅能加强学生的试验意识,通过对实验整个过程中的深切体会,课堂知识也会记得更加牢固。重视实验过程,还能养成良好的实验习惯,如关心爱护实验设备,保持实验台整洁干净等。
鼓励学生养成良好的实验习惯,培养良好实验意识。老师应在实验前让学生做好预习准备工作,明确实验目的和实验过程,保证在实验中减少不必要的错误;其次,学生在实验中要养成实事求是的态度,不能为了完成任务而使科学变成了一项作业;然后要求学生爱护实验教学仪器,并节省实验材料;最后,学生应在实验后做好实验小结,从中获取实验心得和对知识的巩固。至于初中生上实验课纪律难管的问题可以从以下几个方面解决
精心布置实验室环境,创设实验研究的良好氛围。良好的有着浓厚学习氛围的环境则容易让学生进入实验研究的情境中。所以,精心布置实验室是很有必要的。认真对待第一次实验课的教育准备工作。学生的第一次实验课非常重要,教师必须重视。因为第一次实验课将给学生留下深刻印象,这对今后实验能否形成一个良好的习惯至关重要。第一次上实验课可以让学生学习实验规则,给他们介绍上实验课的目的意义等。有条件的学校还可给学生买实验服,让学生觉得做实验是一件很严肃的事情。
变验证性实验为探究性实验,给学生提供自我发展的空间。学生实验多为验证性实验,只是在实验室中通过实验来验证一下。由于已经知道了结果,学生对实验失去兴趣,注意力涣散,破坏课堂秩序。探究性实验能激发学生的学习兴趣和探究欲望,能最大限度地开发学生的学习潜能,同时也给学生的好奇心和创新心理提供了释放平台,学生就会投入热情到实验探索中。
三、结语
生物实验教学为培养学生的综合素质提供了良好的运作空间。实验能培养学生细微、敏锐的观察能力,主动、大胆的探索的实践能力,概括抽象的逻辑辩证思维能力以及丰富的想象力和创造力,从而提高他们解决实际问题的能力。这些都构成了人在自然界和社会中生存与发展必不可少的基本素质。
新课程改革给我们的生物实验教学提出了新的要求,我们要适应这种要求,就要致力于解决生物实验教学中出现的问题,提高教师的综合素质,营造良好的课堂教学氛围,引导学生探究学习,培养学生的创新精神,只有这样,才能更好的促进初中生物实验教学的发展。初中生物教学的改良,对学生各方面的素质,包括思维能力、动手能力、组织能力和团结协作能力都有极大的帮助,因此,广大生物教学工作者应尽职尽责,努力将生物实验教学做好,为祖国培养优秀的人才。广大教育工作者应当齐心协力,共同完成这一任务。
参考文献
[1] 陈庆红: 生物课程标准及实验教材的实践反思,生物学通报,2005(9),23-25 [2] 卢文祥:《新课程理念与初中生物课程改革》,东北师范大学出版社,2003,115-147.[3] 刘恩山:《中学生物学教学论》,高等教育出版社,2003,8,92-101 [4] 王晓程:利克特量表在生物学课程评价中的应用.生物学教学,2004 [5] 荆新娜:探究学习-新课程教学理念的主旋律.中学生物教学 2004,3 致谢:
本文是我在实习期间的思想汇总,在老师谢嗣光的督促和指导下完成的。同在西南大学附属中学实习的队友也提供了帮助。在此对指导、帮助过我写论文的人一并表示感谢!
第7篇:细胞生物学实验总结
细胞自主实验方法总结
自主实验是在老师的指导和帮助下学生自己设计实验且自己准备实验所需的一切准备工作来完成的实验。平时做实验老师占重要地位但自主实验中学生占重要地位。自主实验中学生自己思考设计出实验方案,实验所需试剂,实验方法和步骤然后按该方案来做实验。
老师让学生做自主实验的原因是老师想培养学生的动手能力,合作能力,想让学生独立思考,想让学生亲自动手做实验,最重要的一点是把理论知识结合实践。
细胞培养是在体外模拟体内的生理环境,培养从机体中取出的细胞,并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
本实验采用了微量全血培养技术,培养人体外周血小淋巴细胞,使原处于 G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞, 进而进行有丝分裂,增殖成功率高、技术方法完善。把体外增殖的小淋巴细胞裂解,对细胞核染色体进行染色和 固定,制得人染色体标本,用于进行染色体组型分析,取得了令人满意的效果。
人和动物细胞培养是动物细胞工程的一项基本技术。目前,动物细胞培养主要用于通过大量的细胞培养获得有经济价值的生物产品和细胞本身。1966 年以前基本上用 Mo o r he a d 等,1960年建立的人外周血白细胞培养技术,该方法比较完善,成功率高。但缺点是取血量多,手续较麻烦。近 30 多年来国内外绝大多数均采用微量全血培养技术,不但取血量少,而且可略去一些繁琐操作过程,如离心、分离血浆等,做起来既方便,也节省人力和物力, 比较适于推广和使用。
本实验对实验操作要求比较高。实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60分钟灭菌,以70%酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10分钟后,才开始实验操作。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。操作做成中也要保证不污染。
第8篇:细胞生物学实验思考题
细胞生物学实验思考题
1、为什么暗视场照明的视场暗黑,而样品像明亮?相差显微镜镜检时,为什么要用绿色滤色镜观察活体样本?
暗视场显微镜照明光线不直接进入物镜,只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜,因而视野的背景是黑的,物体的边缘是亮的;
为获得好的效果,要用波长范围窄的单色光,选用绿色滤光镜,不但可满足这个要求,而且绿色可吸收红外光,减少发热。
2、为什么活细胞不易染色,从细胞生物学角度解释原因。
染色剂一般有剧毒,而细胞膜具有选择透过性,会将一部分对细胞有害的物质阻挡在细胞外,所以活细胞难以染色。而当细胞死亡后,细胞膜失去选择透过性,染色剂得以进入,细胞就被染色。
3、简述中性红染液、詹纳斯绿B染液用于细胞超活染色的原理。
Janus green B活体细胞染色的机理:Janus green B是毒性较小的碱性染料,可专一性地对线粒体进行超活染色,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中,这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
Neutral red 碱性染料活体染色的机理:neutral red为弱碱性染料,对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性,只将活细胞中的液泡系染成红色,细胞核与细胞质完全不着色,这可能与液泡中某些蛋白质有关。
4、什么是细胞骨架?它有何主要功能?
生物学中细胞骨架指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络。包括微管、微丝和中间丝。
细胞骨架不仅在维持细胞形态,承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用,而且还参与许多重要的生命活动,如:在细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离,在细胞物质运输中,各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运;在肌肉细胞中,细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统;在白细胞(白血球)的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关。另外,在植物细胞中细胞骨架指导细胞壁的合成。
5、列举你所知道的动、植物细胞中由微丝组成的结构。
肌原纤维、微绒毛、应力纤维
6、显示细胞骨架的原理是什么?说明实验中使用的TritonX-100、戊二醛、考马斯亮蓝R-250的作用。
原理:用考马斯亮蓝对细胞骨架进行染色,染色观察前,应首先用去垢剂抽提掉胞质中的除骨架以外的其他蛋白。
TritonX-100:非离子型去垢剂,可使细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提。
戊二醛:固定细胞
考马斯亮蓝R-250:蛋白质染料,对细胞骨架染色。
7、显示脂类时,制片及染色有何特殊之处?
制片时需要用10%甲醛钙固定液进行固定,要求用苏丹Ⅲ饱和溶液染色,但是对不同部位的脂类进行处理时有区别。
8、简述Fenulgen反应的原理和实验的关键步骤。
原理:DNA经弱酸水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷脂键打开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基,醛基在原位与Schiff试剂结合,形成紫红色复合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色的阴性反应。关键步骤:①Schiff试剂遮光染色30min,一定要遮光;
②压片时,一定要压均匀,否则细胞会重叠,影响观察; ③洗玻片上的试剂,要注意样品不被洗掉。
9、试述差速离心法分离细胞器的原理。
在一定的离心场中(选用离心机的一定转速),球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀的悬浮介质中离心一定时间,组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间,就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部,从而分批收集。
10、试述密度梯度离心法分离细胞器的原理。
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
11、为什么要事先向小鼠腹腔注射淀粉肉汤悬浮液?吞噬细胞的变形运动及吞噬作用的生物学机理是什么?
①诱导小鼠腹腔大量产生巨噬细胞,使其聚集; ②细胞膜具有一定的流动性。