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动物分室2005年总结
一、今年研究任务和进展
1．重要进展
动物分室李震研究员留学荷兰期间与荷兰科学家合作发现动物冠状病毒侵染细胞的新机制，该项研究成果今年11月在世界权威性的病毒学期刊《Journal of Virology》发表。
科技兴农重点攻关项目“重组牛、羊白细胞介素-2下游处理技术研究和动物区域试验”（2001年-2004年）进行了课题鉴定，专家认为该课题在上游基因构建以及下游分离纯化变复性技术方面均有较大创新，特别在牛白细胞介素－2（IL-2）基因工程菌高密度发酵、牛IL-2包含体蛋白变复性技术和临床应用等方面国内外尚未有相同研究，为rbIL-2的中试生产和产业化开发打下坚实的基础。
动物分室的基因工程猪α干扰素表达获得突破。已经筛选到高表达的菌株，目前正在进行高密度发酵和体外分离纯化的研究。
科技兴农重点攻关项目《地方猪种质资源长期保存技术研究》，完成猪精子、胚胎冷冻保存技术研究，进行一定规模的输精和胚胎移植；建立了猪胚胎超低温冷冻保存技术体系，冻胚解冻后复苏率达30%以上，获得冷冻胚胎后代；
此次是我国超低温（-196℃）冷冻保存猪胚胎获得成功的首次报道，解放日报、新华社等作了专题采访报道；相关研究论文将在《科学通报》、《畜牧兽医学报》上发表，并在2005年10月在韩国忠南大学举行的相关国际学术研讨会上作了40分钟的大会报告。
2．其他研究项目进展
1）动物分室参与的国家863项目“免疫增强型鸡球虫基因工程疫苗 ”的研制（2002年—2005年），今年进入关键年，已克隆了数条家禽细胞因子基因。
2）市科委重点实验室项目《猪核移植胚DNA甲基化改变与“印迹”基因表达特征研究》，按计划任务书进行，完成猪体细胞核移植重构胚的购建及激活；重组胚基因组DNA甲基化水平变化的定量分析。
3）市农委四新项目《南德温肉牛种质保存和生产应用技术推广》，研究出适于大型肉牛——南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术。选择适龄南德温牛11头为供体牛进行CIDR-FSH-PG超数排卵处理。按时发情，反应率100%，共采胚99枚，获可用胚胎65枚，平均每头5.91枚，可用胚胎率65.0%，可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%，共移植受体9头，妊娠6头，受胎率66.67%，共产犊9头，其中产双犊3头，其余胚胎进行了冷冻保存。
通过本研究实现了以南德温牛为供体，南阳牛为受体的CIDR-PG-FSH的处理系统，建立了超数排卵，同步发情，胚胎移植，胚胎冷冻保存的整套技术和方法，并获得了较高的可用胚胎率及较高的受胎率，为南德温牛的快速扩群，育种工作及加速黄牛改良提供了有效的方法。
4）科技兴农重点攻关项目“猪流感监测、诊断技术研究”：利用大肠杆菌原核表达系统以重组蛋白的形式成功的表达了猪流感病毒的核衣壳蛋白；完成了重组NP蛋白小量发酵工艺条件的优化，获得外源蛋白表达量占蛋白总量20-30%，基本稳定。
用表达产物作琼脂扩散试验进行活性鉴定，只与猪流感病毒两亚型形成明显的阳性沉淀线，与其它8种猪病原阳性血清呈阴性反应，证实该融合表达的蛋白具有生物学活性，特异性好，可作为检测用抗原。
另外设计了病毒亚型引物组合。分别建立单一扩增不同血清亚型的PCR体系，建立了条件稳定的单一PCR体系，筛选出扩增效果好的引物对，用于猪流感检测的多重PCR。根据各亚型引物扩增片段大小不同，反应条件的差异，将各引物配比组合，形成不同的配组，构建多重PCR组合。
5）动物分室参与的国家863项目“口蹄疫分子流行病学研究与检测”本专题基本完成了项目要求的研究内容，除短期内无法完成流行株测序工作外，其余各项均达到项目要求指标，其中流行病学调查方面还超额完成了项目规定的内容。
本室保存的历年血清样品4500余分，2004年、2005年又采集上海、江苏、安徽、南京等地猪牛血清共计4700余份，共检测华东地区血清样品11885份，完成预期检测指标9000份。
6）科技兴农重点攻关项目“口蹄疫注苗与感染牛（血清）鉴别诊断试剂盒中试生产研究” 经3次发酵，获得重组表达抗原可用于50000头份口蹄疫感染抗体检测量试剂盒生产。完成了组装试剂盒的各条件优化，对试剂盒试剂盒特异性、敏感性、保存期进行了相关研究，证实本试剂盒特异性高达97.8%，敏感性与UBI相比较，检测灵敏度高12.5%，符合率达96%。完成了试剂盒保存期试验，在4℃条件下，至少保存6个月。起草、制订了ELISA试剂盒制造规程，申请发明专利一项，目前进入实质审查阶段。完成2000头份试剂盒区域试验。
7）科技兴农重点攻关项目“预防仔猪细菌性腹泻微生态制剂的研究” 经一年多的努力，送鉴定的三株菌种，已由农业部中国兽药监察所鉴定，分别属嗜酸乳杆菌，pH3.49；粪链球菌和芽孢杆菌。结论是送检三株菌株属农业部1996年文件认可的菌种范畴，另自行鉴定枯草芽孢杆菌和双歧杆菌各一株。已对复壮的微生态菌进行了9种益生元不同浓度间的协同效果试验，乳杆菌产酸、耐酸试验；进行了芽孢杆菌与乳杆菌生产菌种配比组合试验，完成了微生态制剂对致病性大肠杆菌的抑菌试验。于04年下半年提供给中监所和菌种和试验结果。提供菌株有抑制致病性大肠杆菌作用。
完成了申请药证的各项试验，菌种制剂的三株菌株已通过农业部中国兽药监察所鉴定，待正式批文。从而完成了微生态制剂从菌种选择、菌种配比、培养液配制、发酵条件、发酵时间到发酵终止等发酵流程和工艺。保存期试验、有效期试验，安全试验及田间试验
目前已进行了2个场的田间推广试验，共进行了100余头母猪、仔猪1000余头推广应用。试验表明微生态制剂比对照抗菌素猪拉稀降低，而且生产性能有提高。两个场在下半年全场400余头母猪全部使用微生态制剂，减少抗菌素使用。另外，已在江苏、山东两地的新杨饲料厂的用户进行科技示范户试验。已于南汇区进行推广试验。现试验菌株已经农业部鉴定通过，待接到正式批文后，即申请中试批文。预计今年底可推广应用。
二、队伍建设
动物分室的胚胎和基因工程课题组采用企业用工的形式聘用了两名科技人员，以弥补研究力量的不足。新聘用的两位科技人员中，一位具有研究生学历，另一位具有本科学历。
三、人才培养
与江西农业大学，南京师范大学等高校联合培养研究生6 名，今年以优异成绩毕业。
四、开放交流
在上海市引智项目的支持下，我们邀请荷兰Peter J.M.Rottier 教授与2005年11月2日至2005年11月5日期间访问了我们实验室。在访问我室期间，做了“冠状病毒宿主细胞侵染机制”的学术报告，与我室和我院的相关科技人员进行了学术讨论，商讨了我室与乌得勒支兽医学院病毒学研究所进行科研合作的领域和课题。访问期间参观了畜牧兽医研究所，佳牧公司生产车间以及佳牧公司研发中心等科研和科技开发设施。
通过Rottier教授的访问，增进了我室与乌得勒支兽医学院的相互了解和友谊，为双方进一步合作打下良好的基础。目前双方正在撰写课题合作项目建议书，准备向荷兰皇家科学院和中国国家科技部申请支持。
动物分室张德福研究员今年应邀参加第5届国际动物转基因学术研讨会（广州南方医科大学）、第5届国际猪胚胎生物技术学术研讨会（韩国忠南大学）。动物分室开展定期学术报告制度，实验室内的科技人员和研究生每年进行两次学术报告，报告内容包括research report和literature report.通过一年的学术交流，大家普遍感到收获很大，同时也增加了实验室的学术气氛。产学研协作
由动物分室与复旦大学联合研制的“O型口蹄疫基因工程疫苗”今年获得农业部新兽药证书。在申请新兽药证书的过程中，内蒙古“金宇集团”旗下的内蒙古生物制品公司发挥了重要作用，因此，无论是在新产品的研制还是在产品的开发过程中产学研协作无疑可发挥重要作用。
五、运行管理
对室内的仪器设备的运行强化管理。精密仪器由专人负责，使用后登记。物品存放实行按类分区，使物品管理使用更加有条理。实验室日常管理有专人负责。
六、明年发展目标和规划
1．加强牛白介素、猪α干扰素等免疫调节型生物制品的研究
已有牛白介素、干扰素、大肠杆菌不耐热性肠毒素LT等研究基础，这些短肽、细胞因子或蛋白均具备作为免疫佐剂进一步开发的潜力，可为以后常规疫苗，特别是基因工程疫苗免疫效力的提高、被免疫动物缩短产生保护性抗体的时间提供新的途径。
需加强的工作：
（1）加强牛白介素2扩大区域试验和猪α干扰素后处理技术研究，加强动物应用试验，探索动物应用的途径和剂量。完善资料，尽早申报国家一类新兽药证书。
（2）已有文献报道白介素与免疫原串联表达可缩短被免疫动物产生保护性抗体的时间，利用实验室现有的工作基础，加强该方面的研究工作，为预防和控制重大动物疫病的爆发作好技术储备。（3）大肠杆菌不耐热性肠毒素LT－A具有黏膜免疫佐剂的功能，但其本身具毒性，通过定点突变，改变氨基酸组成可降低甚至去除其毒性，而保留其黏膜免疫佐剂的功能。我们在之前的研究工作中已对LT-A的定点突变及LT-B的免疫佐剂功能进行了探讨性研究，取得了一定的进展。在今后的研究工作中将以产业化发展为目标，系统地深化该方面的工作，跟踪国际上在该领域的研究趋势，结合基因工程疫苗的研究，利用基因工程技术开发新的安全、高效佐剂和兽用疫苗。
2、人畜共患病的研究
在已有的口蹄疫、禽流感等人畜共患病研究基础上，借助生物信息学、基因组学和蛋白组学技术方法，突破传统，拓宽研究范围，为防制人畜共患病做好技术储备。
3．构建高水平的基因工程疫苗研究技术平台
从当前和今后畜牧业发展趋势分析，安全高效的基因工程兽用疫苗和生物制剂将会越来越受欢迎，这些疫苗和制剂不仅安全，而且环保，受到用户或市场的欢迎是非常自然的。因此继续在基因工程兽用疫苗方面坚持探索，构建高水平的研制平台，跟踪国际水平的科学研究是非常必要的。4．强化畜禽保种新技术研究
如何保护优良的地方猪种资源，不仅是发展我国当前经济，造福未来的需要，而且其成功的经验对于世界猪种遗传资源的保存具有重大的指导意义。对我国猪种种质资源的可持续性利用意义重大。实验室准备在建立猪胚胎冷冻保存技术的基础上，与上海市农业生物资源基因研究中心合作，首先建立我国优良地方猪种胚胎库（第一步可首先收集长江三交州地区猪种资源）。
通过研究家禽嵌合体制备技术，种细胞保存技术以及保存品种的开发利用技术，实现品种资源保存及利用的有机结合。完善家禽品种资源长期保存方法的研究。通过这些研究，能够最后完善家禽原始生殖细胞（PGCs）的分离、冷冻保存和胚胎转移技术。为家禽品种种质资源库的建立打下良好的技术基础。5．继续深入开展家畜（猪、牛）胚胎技术
体细胞克隆猪研究 前期完成了上海市科技攻关项目《实验用猪克隆技术育种平台的构建及其应用》，初步建立了猪体细胞克隆技术，能获得较高比例的体细胞克隆胚胎，今后将完善胚胎移植技术程序，争取早日获得克隆猪。6．实验室建设
在院及市支持下进行实验室设备的更新。由于我室的仪器设备多是上世纪80年代购置的，大部分已有二十余年的使用时间，如高速离心机、FPLC、超净台等，已处于故障高发期，维修成本越来越高，有的仪器已没有维修价值，急需更换；另外实验室的科学研究范围近几年扩展了许多，如人畜共患病的研究，因此需要加强条件建设。
