每位同学将在家蚕中做一个转基因由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“转基因蚕”。
• 每位同学将在家蚕中做一个转基因，请介绍您将如何选择你感兴趣的目的基因，以及制备目的基因、制作重组DNA分子、筛选阳性克隆和阳性转基因个体的过程？
目的基因：蛛丝蛋白基因。很早之前科学家们就注意到了蛛丝的优良性能：在力学强度上，蛛丝纤维能和用来制造防弹衣和轻型头盔的凯夫拉尔纤维相媲美，其所含牵丝蛋白的强度比钢还要高出十几倍；在柔韧性上，蛛丝可被拉伸到原来长度的1倍到1.5倍而不发生断裂，弹性极佳。可蜘蛛从来都不是一个勤奋的吐丝者，天然蛛丝主要用于结网，产量极低。此外，蜘蛛具有同类相食的特点，无法大规模养殖，而吐丝能手家蚕就能很好地解决这一问题。所以如果能使家蚕具备生产蛛丝蛋白基因有很好的研究意义和经济价值。
目的基因的制备：可以通过pcr分子克隆的方法来制备目的基因。先从cDNA文库里面找到我们所需要的目的基因片段，然后，根据所找到的片段来设计我们所需要的引物。然后就是进行pcr反应，扩增我们所需要的目的基因。
制作重组子：重组子制备的原因，重组子是我们用来将我们的目的基因带到家蚕体内的工具。重组子的构建载体需要满足以下的几个条件。（1）容易进入宿主细胞。
（2）能在宿主细胞中复制繁殖，且具有较高的自主复制能力。
（3）容易插入外来核酸片段，而且插入后不影响其进入宿主细胞和在宿主细胞中的复制。
（4）自身分子质量较小，拷贝数高。
（5）必须带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。
重组体的导入我们采用精子介导的方法把重组子导入到家蚕卵中。
阳性克隆的筛选：对于重组子的筛选，我们要根据的根据所设计的重组子的特点来筛选。我们常用的一种方法是反向pcr。因为PCR只能扩增两端序列已知的基因片段，PCR可扩增中间一段已知序列，而两端序列未知的基因片段不扩增。
反向pcr： 反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA，也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。
经反向pcr后再和我们所测序的基因组进行比对。就能筛选出阳性重组子。
阳性基因克隆的选择：对于重组体在家蚕体内的表达与否，我们可以观察家蚕吐丝的结果，如果能生成类蛛丝一样的蚕丝，则证明成功。
张磊 *** 生物技术2班
