全基因DNA抽提方法(SNET)由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“基因组dna提取方法”。
抽提鼠尾DNA(全基因组)
1.简介
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同;不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。
2.材料与方法 2.1.仪器设备：
聚丙烯管（17*100mm）、预设为55℃的振荡恒温箱、台式离心机。
2.2.材料： 低温保存的鼠尾
2.3.药品：
(1)SNET裂解缓冲液：20mmol/L tris-Cl(pH8.0);5mmol/L EDTA(pH 8.0);400mmol/L NaCl;1%(m/v)SDS(2)蛋白酶K：临时用时再加，保存时20mg/ml(3)乙醇(4)异丙醇
(5)酚：氯仿：异丙醇=25：24：1（v/v/v）。酚和氯仿要避光保存(6)TE(PH 8.0)：(10*Tris EDTA)2.4.方法：(1)溶解鼠尾：
在SNET中加入蛋白酶K，使其终浓度为400ug/ml。将1cm鼠尾放入其中。55℃垂直振荡，消化过夜。
(2)除杂质：
消化过夜的鼠尾溶液为乳白色。剧烈振荡，最大转速离心10min，取上层清液。(3)粗提取：
向上述液中加入等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，密闭管口，颠倒混匀数次。
将溶液置于17*100mm的Falcon聚内烯管中，室温下转速为12000r/min离心10min，分离有机相和水相；吸取上层水相至一新的离心管中。
(4)沉淀DNA：
加入等体积的异丙醇，转速为12000r/min离心10min，收集沉淀的DNA。(5)除异丙醇：
小心去除异丙醇，加入1ml 70%的乙醇，如果沉淀较松散，再离心5min，除去70%的乙醇，室温下空气中干燥沉淀约15~20min。
(6)溶解DNA：
加入0.5mlTE（PH 8.0），4℃下轻柔振荡。(7)电泳检测：
3.各种材料药品作用：
(1)酚：氯仿：异丙醇=25：24：1（v/v/v）的作用： 酚——Tris饱和酚：用于变性蛋白质； 氯仿：用于变性蛋白质，分层； 异丙醇：消除泡沫。(2)SNET裂解缓冲液：
20mmol/L tris-Cl(pH8.0)：用于平衡pH值； 5mmol/L EDTA(pH 8.0)：螯合剂，降解DNA酶； 400mmol/L NaCl：保持盐浓度；
1%(m/v)SDS：破膜，DNA与组蛋白分离.
