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人感染H7N9禽流感标本采集要求
一、人感染H7N9禽流感病毒的病原学：
依据《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（2013第一版）禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为全球首次发现人感染H7N9禽流感病毒。该病毒为H7N9和H9N2重配的新型病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒，基因序列分析表明为禽源病毒。
二、人感染H7N9禽流感监测病例定义：同时具备以下4项条件
依据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》（第一版）
1、发热(腋下体温≥38℃)；
2、具有肺炎的影像学特征；
3、发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；
4、不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。（除第4条不同于不明原因肺炎病例定义，以上三条均相符。不明原因肺炎第4 条为：经规范抗菌药物治疗3－5天，病情无明显改善或呈进行性加重。）
三、标本采集种类：医疗机构应当及时采集病例相关临床样本。
1、上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）；
2、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）
3、血清标本（发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清）；
4、尸检标本（如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集肺组织、气管、支气管等组织标本）；
5、应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）。
四、标本采集主要器材和试剂：
1、拭子：WHO及美国CDC规定，鼻烟拭子采集只能用塑料杆的涤纶或人造棉拭子（如常用的聚酯纤维拭子），不能用藻酸钙拭子或木杆拭子，因可能使某些病毒失活或抑制PCR；脱脂棉含有荧光物质，影响实时应荧光定量PCR结果。
2、压舌板3、3ml Hank’s液螺口采样管
4、封口袋
5、冷藏运输包
6、油性标记笔或标签纸
7、样品登记表
8、真空采血管
9、个人防护装备
五、标本采集方法：
鼻咽拭子采样是流感病原学监测中的一个重要环节,操作简单,但在流感监测工作中却极为重要。标本采集的时间、位臵及质量对能否分离到病毒或提取到有活性的RNA至关重要，而标本保存与运输不当，也会影响病毒的分离。为提高病毒的分离率，在用于病毒分离样品的采集数量、类型和地点方面，实验室技术人员应与流行病学人员达成共识。一般来说，用于病毒分离的样品应与血样同时采集，以便进行血清学诊断。
1、鼻拭子：采集标本时，嘱咐病人头部尽量保持不动，将聚酯纤维头拭子轻轻转动缓缓插入病人鼻孔至颚部(注意：不可太用力，但要尽量深，通常5cm以上)，停留数秒吸取分泌物，轻轻旋转取出拭子，臵采样管折断手接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖。
2、咽拭子：嘱咐病人放松，发“啊”声，立即用压舌板压住病人舌前2／3，聚酯纤维头拭子适度用力多次抹擦悬雍垂（腭垂或小舌，见图）后部咽后壁及双侧扁桃体，避免触及舌部，取出后臵采样管，折断手接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖。
3、切记：咽拭子与鼻拭子采到一个Hank’s管（2—3ml）。如商品化采样管液体过多，采样前倒掉一部分，以提高病毒浓度及阳性率。聚丙烯拭子采样前不需用生理盐水湿润，以吸收更多的分泌物。
4、漱口液标本：在病人发热72小时内尽早采集。先让病人咳嗽几声，将5-10ml无菌生理盐水（不含青霉素）倒入病人口中，让病人头向后倾并发出“噢”的声音，反复几次。将漱口液吐入50ml带垫圈的螺口塑料离心管中，旋紧管盖。
5、尸检组织标本：病人死亡后应尽早进行解剖，采集肺、气管、肾、脾、肝、心脏、脑、血凝块等组织和淋巴结等重要器官标本。每一采集部位分别使用不同消毒器械；每种组织应多部位取材，每部位应取20～50g，淋巴结2个，分别臵于50ml带垫圈的无菌螺口塑料管中，立即臵于-70℃以下保存或冷藏（4～8℃）送至有关实验室。尸检组织标本对于病原学研究非常重要，应尽量多采集。
五、标本的保存、运送
1、标识：油性记号笔或标签纸在采样管上标记标本名称、姓名、编号等；
2、包装：符合“生物安全相关规定” 所采集的标本首先用封口袋密封，周围最好包裹吸水缓冲材料，用第二个封口袋再次密封，放入带冰排的标本运输箱；
3、填写“不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表”，送检表用另一个封口袋密封，不要与标本放到一起；
4、于24 小时内送当地国家流感监测网络实验室检测，最迟不超过48小时，如果有-70℃冰箱，可长期保存。
六、标本采集要求
1、无菌操作：采样人员须以无菌操作采集各类标本。采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。
2、每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。采集单位应指定专人负责标本信息的登记、收集和管理，详细记录信息，并认真填写“不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表”。
3、所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用两层清洁塑料袋包裹严实。
4、采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时附上标本送检单。如不能立即送交，可臵-20℃以下冰箱短暂保存（24小时之内）。
