DNA Extract 血清血浆游离DNA抽提（定稿）由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“血浆游离dna提取”。
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吸附柱法提取血清血浆游离DNA 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。1.200 μL上述预处理的血清/血浆，不足200μL，可加缓冲液GA补足200 μL后进行下面的裂解步骤。
2.加入20 μL Proteinase K溶液，涡旋混匀。
3.加入200 μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，加入1μL Carrier RNA（浓度1μg/μL，为避免反复冻融对Carrier RNA造成的损伤，应提前配好，分装置于-20℃储存备用），轻轻颠倒混匀，56℃孵育10 min，并不时摇动样品，简短离心以去除管盖内壁的液滴。注意：加入缓冲液GB后可能会产生白色沉淀，一般56℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4.加人200 μL乙醇（96-100%），如果室温超过25℃，请将乙醇置冰上预冷，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5min，简短离心以去除管盖内壁的液滴。
5.将上一步所得溶液添加到一个吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CR2放回收集管中。
6.向吸附柱CR2中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。7.向吸附柱CR2中加入600 μL 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。8.重复操作步骤7。
9.将吸附柱CR2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱 CR2置于室温放置2-5min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注：这一
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步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验
10.将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加20μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min，将溶液收集到离心管中。注：最后离心管中的洗脱液，重新吸入吸附柱CR2，再次洗脱离心，可以提高得率。
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