BugBuster Master Mix预混蛋白抽提试剂抽提可溶蛋白由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“总蛋白提取试剂盒”。
BugBuster Master Mix预混蛋白抽提试剂抽提可溶蛋白
1.用经预先称重的离心管10,000g离心10分钟从液体培养体系收集细胞。如果是小规模培养（如1.5ml或更少），可以用1.5ml离心管14,000–16,000g离心。尽量倾去液体，称量细胞沉淀湿重。
2.室温下用吸打或温和涡旋使BugBuster Master Mix与细胞沉淀混匀，每克细胞糊需要5ml抽提试剂。
这相当于50ml培养液采用2.5ml抽提试剂。如果是小规模培养，则采用约1/5培养体积的抽提试剂重悬
沉淀（例如，1.5ml培养液采用300μl抽提试剂）。如果抽提试剂过量也没有什么副作用。
选做：加蛋白酶抑制剂。BugBuster Master Mix与蛋白酶抑制剂兼容。如果目的蛋白后续要用凝血酶
（货号69671），Xa因子（货号69036）或重组肠激酶（货号69066）处理，就应该避免使用丝氨酸蛋
白酶抑制剂。尽管纯化过程可能去除活性抑制剂，建议在酶切前最好做透析或凝胶过滤。
3.室温下将重悬的细胞液在摇板或低速转动搅拌器上孵育10-20分钟。注意：孵育后获得的抽提物不是粘稠的。
4.4℃下16,000g离心20分钟以去除不溶的细胞碎片。如果需要，沉淀可以留作“包涵体纯化”（见以
下说明）的材料。5.将上清转入另一个新试管。这样抽提得到的可溶蛋白溶液可以直接上样于Novagen的纯化树脂（以
及其它很多类似纯化系统）。蛋白溶液在冰上可以短时存放（2-3小时），也可在-20℃长时间存放直至
下步分析。蛋白抽提液应该根据目的蛋白的活性要求的温度存放，有些蛋白经冻融会失活。
