大鼠肝脏和骨骼肌DNA降解与死亡时间的关系由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“大鼠肝脏解剖图解”。
【摘要】 目的本研究的目的是了解大鼠肝脏和骨骼肌dna降解与死亡时间的关系。方法实验
选择21只大鼠，分为7组，每组3只，一组即时处死作为对照，余六组处死后，分别于死后2、4、8、12、24、36小
时分别取肝脏、骨骼肌各一块，福尔马林固定，切片，feulgen染色法染色，自动图像分析仪测量，统计学处理数
据。
结果dna降解的幅度在不同时间存在不一致的现象。结论肝细胞dna的降解与死亡时间在统
计学上存在回归拟合关系。
【关键词】死亡时间，dna降解，肝脏，骨骼肌
【中图分类号】d919．1；07
5【文献标识码】a
【文章编号】1007—9297(2003)01—0035—0
3the relationshipbetweentsd(timesincedeath)andthednadegradationoftheliver and skeletonmusclesin rats．
sun da—hong 1，2，hu hua—zil，2，ding yong 1，liao zhi-gang 2 andc 『g xiao-gan2．1．chengduin—
stitute of criminal science technology，chengdu 610015．2．school of forensic and pre-clinical medicine，sichuan university．chengdu 6100
41【abstract】objective to explore the rdationship between tsd and the dna degradation of the liver and
skeletonmusclein rats． m ethods twenty—one ratswere randomly dividedinto 7 groups，three ratsw&sin each
group．the samples 0{liver and skeleton muscles in one group were collected instan taneously after sacrificed as con—
trol in other 6 groups，the samples ofliverand skeletonmusclewereobtained at 24、8、1224、36 hours aftersacri—
riced respectively．ail samples were fixed with formalin an d stained with feulgen method．the resets of stain were
analyzed by mlas(image—analysis—system)． results the extent of dna degradation disaccords at different
time of death；there are a statistiml formulation between tsd an d the dna degradation． conclusion there are
regre‘ion‘imi‘tat‘ion between the dna degradation of liver and tsd．the tsd can deduce by this way，but it is nec—
earyto studyfurther．
【key words】tsd；degradation of dna；liver；skeleton muscle
死亡时间推断是法医学上的重要课题，长期以照
来，法医学工作者在实验室和实际工作中做了大量的探索、研究工作，一直没有重大突破，至今仍然使
用传统的推测死亡时间的方法。而这些方法由于
多方面的原因，存在比较大的误差，使得判断结果
有很大的偶然性。近年来人们开始研究采用feul—
gen染色人体组织内细胞的核dna并进行图像分
析，根据dna降解的程度判断死亡的时间，但是国
内这方面的研究报告较少。本文将作这方面的尝
试。
材料和方法
一、实验动物
取健康成年大鼠21只，雌雄不限，随机分为7
组，每组3只，6组分别于不同时间用断头法处死，于死后2、4、8、12、24、36小时分别取肝脏、大腿肌
肉各一块，福尔马林固定，经常规组织学处理、切
片，作feulgen染色。第7组动物即时处死作为对
二、feulgen染色法染色
试剂配制及步骤根据feulgen和roenbeck
改良法染色【。
三、图像分析
选用mias2000医学图像分析系统对切片进行
分析。
1．图像摄人：每张切
片在高倍(×400)下随机
选取3个视野。
2．图像测量：选定测量参数为dna，视场面积
30813．67~m2，对其中阳性信号灰度与面积进行测
量。
3．统计学分析：采用sp 10．0软件方差分
析，a=0．05(双侧)。
结 果
肝脏feulgan染色效果较好，可见肝细胞核内
染为紫红色，随着死后时间延长，核内dna染色强
· 36 ·
度下降，但染色细胞数无明显改变。肌肉由于细胞
核较少，加之核的分布不均匀，染色效果欠佳，因此
无法进行图像分析。
将肝组织feu|gen染色结果进行单位面积阳性
细胞计数和阳性细胞灰度作图像分析。并将测定
结果以灰度为自变量(x1)[dy1]，死亡时间为因变
量(y)，作回归拟合，所得公式为y=145．388 +
0．1552 x1—0．3914 x1 +0．11 x1，确定系数0．
657 p
量(x2)，因变量时间(y)作回归拟合，in(y)：in
(15448．5)+x2，确定系数0．388，p
0 0 10 细 3o ．o
时悯
图1 灰度与时间关系回归拟合图
fig 1 regreion and imitation between gray level an d time．
观测值：observed value，立方曲线：cubic curve
0 0 10 细 3o ．o
-| 问
图2 面积与时间关系回归拟合图
fig 2 regreionandimitation between areaandtime
观测曲线：0b curve，复合曲线：∞mp0und curve
讨论
80年代以来，人们应用新兴技术和方法，对某
些器官死后的改变进行了研究。如对大鼠肝糖原
法律与医学杂志2003年第l0卷(第1期)
研究发现死后3小时内无糖原脱失，3～12小时部
分脱失，12～24小时糖原下降至原有的1／5。死后
70小时糖原完全消失。liao zhigang_2 j、黄飞骏
等[3，]用酶组织化学染色，观察死后内脏器官酶的变化。冷兴慧等对肝糖原、肝g-6．pd 的含量变化
进行过研究，发现酶在死后呈下降趋势，但要确定
其下降速度与死亡时间的关系仍有一定差距。
liao zhigang[ ]用扫描电镜技术观察死后尸僵形成时肌节的变化，取得一定成果。90年代初，有人开
始对dna降解进行研究，发现机体在死后组织细
胞dna含量随死亡时间的延长而逐渐下降。徐俊
杰等_6 j用荧光法测定兔死后肝、脾、肾的dna含量
随死亡时间呈下降趋势。涂彬等r 对大鼠死后肝
细胞核dna进行研究，用feulgen染色，在环境温
度10℃、20℃和30℃下用显微分光光度计测定大
鼠肝细胞的dna，发现dna含量下降与死亡时间
呈负线性相关。随着温度增加，dna含量下降速
度明显加快。
本实验结果发现，肌肉细胞由于核分布不均
匀，染色效果差，未纳入统计，对肝细胞选择了3个
技术指标，其中两种参数，即阳性信号灰度(x。)与
面积(x2)随时间的变化，统计学处理显示较有意
义。经统计学处理，本实验得出大鼠肝细胞dna
降解的回归拟合方程如下：
y = 145．388 + 0．1552 xl一0．3914 xl + 0．xl
3，确定系数0．657 p
1)。
in(y)=in(15448．5)+x2，确
定系数0．388，p
feulgen染色是一种稳定的只对dna着色的染色法，通过分析系统对其阳性信号的灰度、面积
进行测定可以如实反映出细胞核内dna的含量及
其变化。这与林乐泉_8]等的结果相似，但从确定系
数看，阳性信号灰度变化结果优于阳性细胞面积测
定。
本实验结果表明，dna降解的幅度在不同时
间存在不一致的现象。本实验的结果证实与以前
学者所提出的细胞核dna的含量随死亡时间的延
长而呈下降趋势的结论有相似之处，但骨骼肌效果
差，而肝细胞相对较好。统计分析研究提示，肝细
胞dna的降解与死亡时间在统计学上存在较好回
归拟合关系。
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(收稿：2002—07—29，修回：加02—12—16)
