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不同处理条件对洋葱鳞茎表皮细胞骨架形态的影响
摘要：细胞骨架是活细胞的重要结构，研究细胞骨架的形态对于进一步研究其功能具有重要意义。本研究以洋葱为材料，设置了4个不同的1%Triton X-100抽提非骨架蛋白时间(10min.15min..25min.40min)对洋葱细胞骨架显微观察的关键条件进行了优化，同时分析了0.1mol钙离子以及秋水仙素处理对洋葱细胞骨架形态观察效果的影响。
关键词：细胞骨架
洋葱鳞茎
显微观察
材料和方法
1)材料
2)实验材料：新鲜洋葱鳞茎的内表皮 3)仪器：培养箱
显微镜
4)试剂及其配置：1%Triton X-100/M-缓冲液
固定液，3%戊二醇，pH为7.3
0.2%考马斯亮蓝R250染液
0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（PBS,PH为6.8）
M-缓冲液
实验方法
(一)试验方法
a)洋葱细胞骨架制备的关键条件优化
取洋葱内表皮8张，大小约为0.5cm×0.5cm，放到培养皿中，然后用0.01mol/L磷酸盐缓冲液浸泡8分钟，加入1%Triton X-100分别处理洋葱内表皮10min.15min.25min.40min 以优化最佳观察条件
b)钙离子处理方法
取洋葱内表皮8张，大小约为0.5cm×0.5cm，分别取两张浸入0.05mol/L.0.10mol/L.0.15mol/L的氯化钙溶液中处理2小时，另外两张不作处理，设为对照。
c)秋水仙素处理方法
取洋葱内表皮4张，大小约为0.5cm×0.5cm，两张浸入0.1%秋水仙素溶液中处理24小时，另2张不作处理，设为对照。
(二)细胞骨架的制片与观察
首先将洋葱片放入装有PH值6.8磷酸缓冲溶液的小玻璃瓶中，使其下沉，然后吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100处理25分钟（抽提骨架以外的蛋白质），吸去1%Triton X-100后，用M-缓冲液洗3次，每次3分钟，洗涤的同时可以稳定细胞骨架，再用3%戊二醇固定15分钟，吸去戊二醇后，用PBS洗3次，每次3分钟，用0.2%考马斯亮蓝R250染色15分钟，用蒸馏水洗涤2次，取出洋葱鳞茎内表皮，展平在载玻片上，空气干燥，最后镜检。
讨论
细胞骨架是细胞内弹性框架结构，对维持细胞结构的稳定、保持细胞完整性还有细胞功能的完善有着重大意义，而细胞骨架本身也容易受外界因素影响而发生变化的，如化学因素，物理因素都可能会造成骨架蛋白的变性，细胞骨架可分为微丝、微管和中间纤维，它们都可能会受到各种因素的影响而变化，本实验探讨了1%Triton X-100抽提非骨架蛋白时间、钙离子、秋水仙素与洋葱鳞茎内表皮细胞骨架观察的关系
