噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选（集锦2篇）由网友“五香兔头”投稿提供，以下是小编为大家准备的噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选，仅供参考，欢迎大家阅读。

篇1：噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

目的: 运用DNA家族改组方法提高水蛭素的抗凝血酶活性.方法: 将水蛭素HV1、 HV2、 HV3基因等量混合, 用DNase I消化, 回收50 bp左右的`片段, 再经无引物和有引物PCR扩增获得与原基因大小相同的改组分子, 构建噬菌体展示的水蛭素改组文库, 经凝血酶亲和淘选, ELISA筛选高活性的水蛭素变异体.结果: 经过DNA改组和噬菌体亲和筛选, 成功获得抗凝血酶活性提高的水蛭素变异体HV2-N47K.结论: 用DNA家族改组及亲和淘选技术能够筛选出高活性的水蛭素变异体蛋白, 这为其他分子的改组提供了借鉴.

作 者：龙铟 刘家云 刘莉 王宗仁 LONG Yin LIU Jia-yun LIU Li WANG Zong-ren  作者单位：龙铟,王宗仁,LONG Yin,WANG Zong-ren(第四军医大学西京医院中医科,陕西,西安,710032)

刘家云,LIU Jia-yun(第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,710032)

刘莉,LIU Li(第四军医大学药学系药理学教研室,陕西,西安,710032)

刊 名：细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q81 关键词：水蛭素   DNA改组   亲和淘选  

篇2：随机十肽库的构建及血管形成素结合肽的筛选

随机十肽库的构建及血管形成素结合肽的筛选

将合成的含有随机序列(NNK)10的寡核苷酸片段,克隆入噬菌体呈现载体噬菌粒pCANTAB5E的SfiⅠ,NotⅠ位点,即cpⅢ蛋白信号肽与成熟肽之间,电转化E.coli TG1,构建了噬菌体表面呈现的十肽库,实际库容为3.53×107,插入率为66.7%.经辅助噬菌体M13KO7超感染后,获得滴度为4.8 ×1011 pfu/ml的'噬菌体上清.经过两轮panning筛选和富集,从构建的随机十肽库中筛选到26个具有血管形成素结合活性的重组噬菌体克隆,对其中12个阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析,ELISA检测结果显示12个阳性噬菌体克隆都能够与血管形成素特异性结合.

作 者：杨辉 张英起 颜真 韩苇 药立波 苏成芝 YANG Hui ZHANG Ying-Qi YAN Zhen HAN Wei YAO Li-Bo SU Cheng-Zhi  作者单位：杨辉,张英起,颜真,韩苇,YANG Hui,ZHANG Ying-Qi,YAN Zhen,HAN Wei(第四军医大学生物技术中心,西安,710032)

药立波,苏成芝,YAO Li-Bo,SU Cheng-Zhi(第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,西安,710032)

刊 名：生物化学与生物物理进展  ISTIC SCI PKU英文刊名：PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS 年，卷(期)：2000 27(6) 分类号：Q74 关键词：噬菌体表面呈现   随机短肽库   血管形成素