生化实验五 原花色素分离纯化及鉴定由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便”。
原花色素的提取纯化和鉴定
(一)山楂原花色素的提取
(二)原花色素的测定（盐酸-正丁醇法）
原理
原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。
生理功能：
1.最好的心脏保护剂。抵御引发心血管病的诱变因素的冲击。强化血管，有消肿化瘀的功效。减少毛细血管的阻力和改善渗透性，使细胞更容易吸收养分与排除废物。
2.高校抗氧化能力。清除氧自由基的能力比其他天然抗氧化剂如胡萝卜，维生素C和E，儿茶素等强很多。
3.产生组胺的抑制剂，减轻炎症。抗过敏，皮肤保健，抗衰老。
利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附，洗脱得到原花色素。
D101树脂是一种球状，非极性教练聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类，黄酮类，生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取泪滴性质的有机物质。
原花色素的检测方法：
1.紫外分光光度法：利用原花色素在波长280nm处具有最大吸收的特点。该方法简便易行，但提取物成分多样，标准难定。
2.香草醛检测法：原花色素在酸性条件下，其组成单元儿茶素的A环上的羟基和香草醛发生缩合反应，在浓酸的作用下形成的产物变为有色的正离子。3.铁盐催化比色法 4.薄层层析法 5.HPLC法
6.HPLC-MS质谱法
试剂：
1)1mg/ml原花色素标准品（实验室提供）
精确称取10.0mg原花色素标准品用甲醇溶解，与10.0ml容量瓶中定容至刻度。2)Hcl-正丁醇（自配）
取5.0ml浓盐酸加入95.0ml正丁醇中混匀。
3)2%硫酸铁铵：称取2.0g硫酸铁铵溶于100.0ml2.0mol/LHCl中。
4)样品液：将上次实验收集的样品溶液用甲醇稀释至一定浓度（1.0~3.0mg/ml）。
操作
1.称取新鲜山楂10.0g，剪成细小块状，置于锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，沸水浴45min，间期混匀。冷却后加入20ml蒸馏水，抽滤，滤液备用。2.取一根层析柱（1.5×20cm），洗净，竖直装好，关闭出口，加入蒸馏水约1cm高，用烧杯取一定量已处理好的大孔吸附树脂D-101，搅匀，严管内壁缓慢加入，待柱底积约1cm高时，缓慢打开出口，继续装柱至高度15cm（液面高于树脂约3cm）。3.平衡：用蒸馏水洗2倍体积的柱床体积（约30ml），控制流速在1ml/min左右,至流出液pH显中性。
4.滤液上样(约2ml/min)。上完样后，先用蒸馏水洗2倍柱床体积洗脱（1ml/min 约30min），然后换60%乙醇进行洗脱，控制流速在1ml/min。待有红色液体流出时开始收集，直至收集液无红色为止。
5.将收集液用60%乙醇定容至100ml，留作测定。
注意事项：
1.实验前应检查层析柱是否完好，有无堵塞或漏气现象。
2.装柱要求连续、均匀、没有气泡和断纹，液面不得低于树脂表面，否则应重新装柱。3.洗脱时流速不宜过快。
