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微管蛋白对于抗体选择和解释蛋白质印迹条带之间的作用
在人和其它脊椎动物中,肌动蛋白是由六种蛋白组成的蛋白家族,共分为3组: alpha(ACTC1, cardiac muscle 1), alpha 1(ACTA1, 骨骼肌)and 2(ACTA2, 主动脉平滑肌), beta(ACTB), gamma 1(ACTG1)and 2(ACTG2, 肠道平滑肌)。beta和gamma 1是两种非肌型肌动蛋白。它们充当微丝的主要组成部分。肌动蛋白是高度保守的。来源于各种如人、小鼠和鸡的beta肌动蛋白都是相同的。人源beta肌动蛋白与真菌的同源蛋白有近90%的相同性。人源beta肌动蛋白与人源肌动蛋白家族中的其它成员至少有93%是相同的。这些肌动蛋白家族成员间以及种族间的同源性信息对于抗体选择和解释蛋白质印迹条带是很重要的。
beta和alpha肌动蛋白在蛋白质印迹实验中一直被用作内参。细胞生长条件的改变会破坏肌动蛋白的合成。有报道表明beta肌动蛋白在蛋白质印迹分析中可能不是一个可靠的内参。beta肌动蛋白也存在于核内,作为染色质重塑复合物的一个组成部分。
甘油醛-3-磷酸脱氢酶糖酵解中 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH, G3PD, GAPD)在有无机磷酸盐和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的情况下催化甘油醛-3-磷酸的可逆氧化磷酸化。它也有亚硝化酶活性并参与基因转录、RNA运输、DNA复制和凋亡。
GAPDH是一个管家基因,在蛋白质印迹和PCR中都被用作参照。GAPDH在物种间是高度保守的。例如,人源由335个氨基酸组成的GAPDH其全长有70%与Arabidopsis thaliana中由422个氨基酸组成的同源蛋白是相同的。一项全面的研究表明GAPDH mRNA水平在不同组织类型中有显著差异,但是相对于年龄和性别而言却是保持恒定的。
微管蛋白有五种微管蛋白:alpha、beta、gamma、delta和epsilon。alpha和beta微管蛋白组成的异源二聚体是微管的构成组分。alpha微管蛋白的亚型包括1a(TUBA1A)、1b(TUBA1B)、1c(TUBA1C)、3c(TUBA3C)、3d(TUBA3D)、3e(TUBA3E)、4a(TUBA4A)和8(TUBA8)。I类(TUBB)、IIa类(TUBB2A)、IIb类(TUBB2B)、III类(TUBB3)、IVa类(TUBB4A)、IVb类(TUBB4B)、V类(TUBB6)、VI类(TUBB1)和VIII类(TUBB8)都是beta微管蛋白的亚型。gamma微管蛋白,gamma 1(TUBG1)和2(TUBG2),参与微管的成核和极性排列,并存在于中心体和纺锤体极体中。delta(TUBD1)和epsilon(TUBE1)微管蛋白往往位于中心粒处,并且是有丝分裂纺锤体的结构部件。
微管蛋白在物种间是高度保守的。例如,人源有451个氨基酸的微管蛋白alpha 1a与酵母中由445个氨基酸组成的同源蛋白Tub3p有74%是相同的。alpha、beta和gamma的亚型也都是非常类似的。人源alpha微管蛋白相互间有超过90%的相同性。不同型的微管蛋白也有显著的同源性。人源alpha微管蛋白和人源beta微管蛋白有40%相同性。
alpha、beta和gamma微管蛋白都一直被用作内参。微管蛋白是多组药物的药理靶点,像抗癌药物紫杉醇(Taxol)、Tesetaxel、长春碱(vinblastine)和 长春新碱(vincristine),抗痛风剂秋水仙碱(colchicine)和抗真菌药物灰黄霉素(griseofulvin)。这些药物都会影响体外和体内的微管蛋白表达。
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